重组DNA分子模拟制作精讲.pptVIP

选修3 现代生物科技专题 模拟实验 多个EcoRI酶切后的载体与目的基因混合之后，加入DNA连接酶，其连接产物将有几种？(为了方便分析，至多考虑两个分子相连接) 载体与载体之间的连接 目的基因与目的基因之间的连接 如何筛选出含目的基因的重组DNA呢？ 提示：在基因工程的实际操作中，科学家选择的载体往往含有两个或更多的标记基因。 如果在目的基因的插入位置有一个标记基因，当目的基因插入后，标记基因将被破坏而无法表达，从而达到筛选目的。 （1）有一或多个限制酶切点,以便目的基因可以插到载体上 （2）有一个或多个标记 基因，便于筛选 （3）必须能在受体细胞 中稳定保存并具备复制、 表达的能力。（或整合到 染色体DNA上，随染色体 DNA进行同步复制。） （4）对受体细胞无害 （5）大小合适，利于 提取和操作 DNA连接酶 DNA聚合酶 限制酶 DNA水解酶 解旋酶 RNA聚合酶 基因的载体： ①在宿主细胞中能保存下来并能大量复制。 ②有多个限制酶切点，以便与外源基因连接。 ③具有标记基因，以便进行筛选。 ④对受体细胞无害、易分离。 ⑤载体DNA分子大小应适合，便于提取和操作。 运载体的作用： 运载体必须具备的五个条件： 作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞中 利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制 基因工程的操作工具 载体的特点： 目的基因所在片段 运载体 PStⅠ DNA连接酶 重组DNA 运载体自连 目的基因 自连 CTTAA G AATTC G CTTAA AATTC G G PSt Ⅰ 目的基因与运载体连接 pBR322质粒结构 如果外源DNA插入，氨卞青霉素抗性基因失活 标记基因 进行筛选 限制性内切酶 识别序列 外源基因连接 PStⅠ PStⅠ 自主复制 若干种酶的比较 * 分别代表什么酶？ A A T T G C A A T T A A T T DNA聚合酶 DNA聚合酶 DNA聚合酶 DNA聚合酶 DNA聚合酶 基因工程的操作工具 * 学生在笔记本上画出原核与真核基因的结构模式图，要求有编码区、非编码区、启动子、终止子、外显子、内含子。 1-1 重组DNA分子模拟制作 生物科技创造美好未来 阅读课本，归纳思考：作为“分子运输车”，需要具备哪些条件？ EcoRI酶切后的载体和目的基因 目的基因 载体 载体与目的基因之间的连接 载体自身头尾相连接（自身环化） 目的基因自身环化 同向插入 ○ ○ 反向插入 ○ ○ 为什么EcoRI酶切后会有这么多种连接产物呢？ 结论：一种限制酶切割后产生的黏性末端只有一种，相同的黏性末端之间可以任意连接。 ↗ ↗ ↗ ↗ ↗ ↗ 载体自身环化和目的基因自身环化 是干扰重组的常见因素。如何避免？ 两种限制酶切割产生的黏性末端不同 载体及目的基因无法自身环化 无法连接 ↘ ↘ ○ ○ 正确连接 ○ ○ 载体与载体间，目的基因与目的基因间仍可连接 载体特点中除有多个酶切位点外，还携带标记基因。 载体与载体重组DNA 载体与目的基因重组DNA ←目的基因 pBR322质粒结构 如果外源DNA插入，氨卞青霉素抗性基因失活 标记基因 进行筛选 在基因工程中，真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行人工改造的。 * 学生在笔记本上画出原核与真核基因的结构模式图，要求有编码区、非编码区、启动子、终止子、外显子、内含子。