01-2014级硕士高级免疫学实验技术-浅析.ppt

沉淀反应 凝集反应 免疫标记技术 抗原抗体反应 LOGO LOGO LOGO LOGO LOGO LOGO LOGO LOGO LOGO LOGO LOGO 高级免疫学实验技术 2014级硕士研究生 吉林大学基础医学院 免疫学系 免疫学实验技术概述 免疫学实验技术概述 小调查-对免疫学实验技术的了解 目前你知道的免疫学实验技术有哪些？ 这些免疫学实验技术的原理是什么？ 这些技术有什么应用？ 免疫学实验技术概述 现代免疫学技术 免疫学技术的范畴 1、对具有免疫活性物质的定性、定量测定 2、对免疫系统的组成成分的数量、状态的测定 免疫学检测技术的评价 一、评价标准 Specificity（特异） Sensitivity（敏感） Simplicity（简便） Safety（安全） Saving（节约） 二、特异性与敏感性的关系 特异性高、敏感性低 敏感性高、特异性低 免疫学实验技术概述 抗原抗体反应 淋巴细胞的检测技术 细胞因子的检测技术 免疫学常用的分子生物学技术 多克隆抗体 单克隆抗体 基因工程抗体 前两者常用于实验研究，而后者用于临床治疗研究。 抗体的应用 多克隆抗体是通过免疫动物血清分离获得 优点：制备方法比较简单，价格低廉，制备所需时间短等 在确定新基因编码蛋白研究方面，仍然是首选抗体类型。但由于多克隆抗体含有针对多个抗原表位的抗体成分，也可能包括抗原变性后暴露的新抗原表位，因此，多克隆抗体在检测变性抗原——如采用Western Blot检测蛋白时，其效果比单克隆抗体更敏感。 多克隆抗体 缺点： 纯度差 易发生交叉反应 来源有限 所产生的抗体因动物个体差异滴度不同 不易标准化 因免疫动物血清中含有非常复杂的多种蛋白质成分，所以在进行实验室分析、检测之前，必须将其有效的抗体成分分离、纯化。 多克隆抗体 单克隆抗体(mAb)是通过B细胞杂交瘤获得 与多克隆抗体相比，单克隆抗体主要具有以下三个显著特点（优点）： ①高度均质性 ②高度特异性 ③来源稳定 不足： 制备方法比较复杂，价格昂贵，制备所需时间较长。 单克隆抗体 根据实验的目的不同，其分离、纯化的纯度要求也不同。 作为ELISA检测时的抗体，部分情况下饱和硫酸胺纯化即可； 最常使用的抗体是经过A蛋白(Protein A)亲和层析获得的IgG型抗体； 免疫放射测定的标记用抗体必须达到双级纯才可应用(亲和层析纯+SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳纯)。 纯度要求 单克隆抗体在制备过程中经过严格的筛选，因此应根据不同的应用目的选择不同单克隆抗体亚类，如标明供ELISA检测用的单克隆抗体，可能不适合Western Blot检测。 作为初学者尤其应该注意各类单克隆抗体标明的应用范围，而多克隆抗体一般情况下均有较宽的适用范围。 适用范围 一抗和二抗 一级抗体：抗原特异性的抗体 二级抗体：抗抗体（针对一抗的Fc段，具有种属特异性） Ag Ag LOGO LOGO LOGO LOGO LOGO LOGO LOGO LOGO LOGO LOGO LOGO