第3章菌种选育理论与技术解答.pptVIP

微生物杂交育种所使用的配对菌株称为直接亲本。由于多数微生物尚未发现其有性世代，因此，直接亲本菌株应带有适当的遗传标记。常用的遗传标记有颜色、营养要求和抗药性等。 营养标记菌株（即营养缺陷型菌株）是最常用的遗传标记之一。 所谓营养缺陷型菌株是微生物经诱变剂处理后产生的一种生化突变体。由于基因突变，它失去了合成某种物质（氨基酸、维生素或核苷酸碱基）的能力，在基本培养基上不能生长，大多数营养缺陷型菌株需要补加一定种类的有机物质后才能生长。 2、遗传标记 本章主要内容 第一节 概述 第二节 菌种分离筛选 第三节 自然选育 第四节 诱变育种 第五节 原生质体技术育种 第六节 基因工程技术育种 发酵工艺学 所谓原生质体融合就是把两个亲本的细胞壁分别通过酶解作用加以瓦解，使菌体细胞在高渗环境中释放出只有原生质膜包裹着的球状体（称原生质体）。 两亲本的原生质体在高渗条件下使之混合，由聚乙二醇（PEG）作为助融剂，使它们互相凝集，发生细胞融合，接着两亲本基因组由接触到交换，从而实现遗传重组。在再生成细胞的菌落中就有可能获得具有理想性状的重组子。 5. 原生质体融合技术 从现有资料看，原生质体融合技术有以下优点 （l）去除了细胞壁的障碍，亲株基因组直接融合、交换，实现重组，不需要有已知的遗传系统。即使是相同接合型的真菌细胞也能发生原生质体的相互融合，并可对原生质体进行转化和转染。 （2）原生质体融合后两亲株的基因组之间有机会发生多次交换，产生各种各样的基因组合而得到多种类型的重组子。 参与融合的亲株数并不限于一个，可以多至三个、四个，这足一般常规杂交所达不到的。 （3）重组频率特别高，因为有聚乙二醇作助融剂。 5.1 原生质体融合的优越性 （4）可以和其他育种方法相结合，把由其它方法得到的优良性状通过原生质体融合再组合到一个单株中。 （5）可以用温度、药物、紫外线等处理、钝化亲株的一方或双方，然后使之融合，再在再生菌落中筛选重组子。这样往往可以提高筛选效率。 由于以上优点，利用原生质体融合来培育工业新菌株已受到国内外普遍重视。 ? 5.2 原生质体融合技术一般步骤 1. 选择亲株 选择遗传性状稳定且具有优势互补的两个亲株； 亲株带上遗传标记； 测定遗传标记的稳定性。 2. 原生质体制备 一般采用酶解法除壁。根据微生物细胞壁组成和结构的不同，采用不同的酶，有时还要采取一些措施，如添加甘氨酸、蔗糖或抗生素等，以提高细胞壁对酶解的敏感性； 原生质体对渗透压极其敏感，低渗易引起细胞破裂。一般将原生质体放在高渗的环境中维持它的稳定。 3. 原生质体融合 两亲本的原生质体在高渗条件下使之混合，由聚乙二醇（PEG）作为助融剂，使它们互相凝集，发生细胞融合，接着两亲本基因组由接触到交换，从而实现遗传重组。在再生细胞的菌落中就有可能获得具有理想性状的重组子。 4. 原生质体再生 原生质体再生就是使原生质体重新长出细胞壁，恢复完整的细胞形态结构； 为获得较高的再生率，在实验过程中应避免剪切力过大使原生质体破裂； 涂布时，原生质体浓度不宜过高； 菌龄、再生时的温度、溶菌酶用量和溶壁时间等因素都会影响原生质体的再生。 5. 筛选优良性状融合重组子 原生质体融合后，来自两亲代的遗传物质经过交换并发生重组而形成的子代称为融合重组子。 融合重组子的检出方法： 直接法 将融合液涂布在不补充亲株生长需要的生长因子高渗再生培养基平板上，直接筛选出原养型重组子。 间接法 把融合液涂布在营养丰富的高渗再生平板上，使亲株和重组子都再生成菌落，然后用影印法将它们复制到选择培养基上检出重组子。 筛选出来的融合重组子还需要对它们进行生理生化及生产性能的测定。 本章主要内容 第一节 概述 第二节 菌种分离筛选 第三节 自然选育 第四节 诱变育种 第五节 原生质体技术育种 第六节 基因工程技术育种 发酵工艺学 发酵工艺学 第六节 基因工程技术育种 一、概述 二、基因工程育种的优点 二、基因工程技术育种的设计 如果将一种生物的