花卉学实验精讲.doc

实验一、二 “雪柳组织培养技术探究”综合实验 摘要：实验以MS培养基为培养基，设计并配置了母液，完成了诱导培养，初步体验了雪柳的离体培养过程。实验以正交实验设计母液，希望筛选出最优配方。 关键词：雪柳；组织培养； A 母液及培养基的配置（实验原理：组织培养所用培养及含有植物生长所必需的各类营养物质，同时也要灭菌，确保无菌操作的进行） 1 实验试剂和仪器设备 1试剂 琼脂蔗糖 蒸馏水 1mol/lNAOH溶液，各类母液，植物激素。 2仪器设备 电子天平 烧杯 两桶 移液管玻璃棒 钥匙 称量纸 PH试纸 锥形瓶等 2实际方法及步骤 1取 7g琼脂加水，加热使之完全融化，再加15g蔗糖。 2依次吸取适量ms培养基母液 3按如下设计方案，添加激素，配置含有不同激素配比的MS培养基。 编号 /试剂（单位mg/L） 6BA 2-4D 香蕉泥 1 0.5 1 10 2 1 0.25 10 3 1 0.5 30 4 1 1 无 5 无 无 无 4定容到需要的体积，并用1mol/LNAOH溶液调整培养基溶液PH至5.8-6.0， 5将配制好的液态培养基分装到培养瓶中，分装量20-30ml/瓶，厚度为培养瓶底部1cm左右即可。 6研讨设计的不同激素配比的培养基配方。 7装瓶的培养基进行高压灭菌处理，在高压灭菌锅121摄氏度下进行20MIN。 8经过高压灭菌后的培养基冷却凝固，待接种用， 9包好实验用具（培养皿，烧杯），加蒸馏水用高温灭菌锅在121摄氏度经过三分钟灭菌。 实验注意事项， 配置培养基前提前大致估计一下药品数量，不够提前配置。 琼脂不可加热太快，以防止加热太快琼脂结块 培养基灭菌时注意放干净冷空气 药品切记加错， 注意把培养基平放，以防倾倒， 灭菌完成培养基勿动，待培养基冷却凝固。 B 诱导培养操作 1实验试剂和设备 1试剂：75％的酒精、95％的酒精、0．1％的升汞（(氯化汞，HgCl2)）、无菌水、无菌滤纸等。? 实验器具：超净工作台、盛有培养基的培养瓶、接种器械（主要指解剖刀、剪刀、镊子等）、酒精灯。 2、方法和步骤 1．用水和肥皂洗净双手，穿上灭菌过的专用实验服、帽子与鞋子，进入接种室。????? 2．打开超净工作台和无菌操作室的紫外灯，照射20min。? 3．操作前5min使超净工作台处于工作状态，让过滤室空气吹拂工作台面和四周的台壁。? 4．照射20min后，关闭紫外灯。? 5．用75％的酒精擦拭工作台和双手。? 6．用蘸有75%酒精的纱布擦拭装有培养基的培养器皿，放进工作台。? 7．点燃酒精灯，把解剖刀、剪刀、镊子等器械浸泡在95％酒精中，在火焰上灭菌后，放在器械架上。 8．外植体灭菌处理，打开超净工作台，用75%酒精擦拭双手与工作台，将植物外植体放入75%酒精浸没30s,用清水冲洗一次，将外植体放入0．1％的升汞浸泡3分钟，用无菌水冲洗3次。 9.按需适当剪切外植体，注意辨别外植体形态学的上下端。 10.将培养瓶倾斜拿住，打开瓶塞时靠近酒精灯火焰上方烤一下，打开瓶口，快速讲外植体接种到培养基，再在火焰口烧一下，塞上塞子。 11．每切一次，解剖刀，镊子都要酒精内浸泡，并灼烧。（步骤9,10,11均在酒精灯火焰处处理） 12 .将培养基放置在适宜环境培养 实验结果观察及分析。 实验观察：少数培养基污染，两个月后观察，无一诱导成功。玻璃化、褐化不明显，几乎全部为出现白色愈伤组织。 分析：1实验培养基和激素配比没有针对性，外植体是临时确定的，木本植物相对比较难组培。实验没有成功，但是说明，这种方法是行不通的。 2实验愈伤组织明显，但是没有诱导成功，激素配比，培养基，蔗糖浓度都可能影响，后续实验可以继续前进探索。 3对于外植体灭菌处理不当，95％的酒精、0．1％的升汞浸泡时间过长，处理时已发现部分植物遭到破坏 实验三：增殖培养（继代培养） --以垂吊牵牛为例 继代培养的定义：继代培养是指愈伤组织在培养基上生长一段时间后，营养物枯竭，水分散失，并已经积累了一些代谢产物，此时需要将这些组织转移到新的培养基上，这种转移称为继代培养或传代培养。 继代培养的方法: 多节茎段增殖 将顶芽或腋芽萌发伸长形成的多节茎段嫩枝，剪成带1-2枚叶片的单芽或多芽茎段，接种到继代培养基进行培养的方法。 （2）丛生芽增殖 将顶芽或腋芽萌发形成的丛生芽分割成单芽，接种到继代培养基中的方法。 （3）不定芽增殖 将能再生不定芽的器官或愈伤组织分割，接种到继代培养基中进行培养的方法。 （4）原球茎增殖 将原球茎切割成小块，也可以给予针刺等损伤，或在液体培养基震荡培养来加快其增殖进程。 （5）胚状体增殖 通过体细胞胚的发生来进行无性系的大量繁殖，是增殖系数最大