毛细管电泳研讨.ppt

简介 毛细管电泳的基本原理及特点 仪器流程及主要部件 毛细管电泳的分离模式 CE相关技术 毛细管电泳的应用与发展动向 毛细管电泳发展趋势 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 小chip将是CE发展的一个重要趋向，将一个实验室的工作集成到一块很小的芯片上，能使仪器微形化。可以预见，不久就会出现各种专用的基因检测、疾病诊断的小型chip及仪器。将会研制适合CE用的各种检测器，以进行单细胞和单分子的检测。单细胞检测为在分子水平上了解细胞的各种行为提供了强有力的工具，而单分子检测为在单个分子水平上开展化学动力学，反应动力学等研究提供了可能性。此外，CE在环境科学中也会有较大发展余地。 CE是正在发展的研究领域，有很多理论及实际问题有待解决，更需其它领域的研究人员来扩大其应用范围。CE的成长将为生命科学、材料科学、环境科学提供又一强有力的研究手段，CE也在不断解决难题的过程中得到发展。 Thank you !! * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 不同离子的淌度不同，所形成区带的电场强度不同(ν=μE)，淌度大的离子区带电场强度小； 沿出口到进口，将不同区带依次排序1、2、3、4? ? ? ?电场强度依次增大。假设“2”号中离子扩散到“3”号，该区电场强度大，离子被加速，返回到“2”区；当“2”号中离子跑到“1”号区，离子被减速使之归队； 6. 毛细管电渗色谱(CEC) 将HPLC中众多的固定相微粒填充到毛细管中(或涂渍到管壁)。以样品与固定相之间的相互作用为分离机制，以电渗流为流动相驱动力的色谱过程称为CEC。CEC将CE的高效和HPLC的高选择性相结合，得到了CE研究者的青睐。90年代初解决了毛细管填充技术后，CEC发展迅速。 主要有两种类型： 填充柱毛细管电色谱——基于填充柱的电色谱是各种电泳中最新出现的一种技术。它是利用电渗透驱动极性溶剂通过反相高效液相色谱毛细管柱，利用试样在两相的分配进行分离。 胶束电动毛细管色谱——是在缓冲溶液中加入浓度高于胶束临界浓度的表面活性剂。胶束相在分离中起到了准固定相的作用，电中性的有机化合物按照它们在水相和有机相之间分配系数的差异进行分离。该方法也可用来改善带电有机化合物的分离选择性。 毛细管电渗色谱的优点： 像HPLC ，能够分离不带电荷的物质。 像毛细管电泳法，不需要压力泵系统的情况下，提供了微量体积试样溶液的高效分离?通过电渗流泵，而不是通过机械输送流动相通过固定相的。明显地简化了输送体系。 电渗泵产生的是塞子式流动轮廓，而不是流体动力学轮廓，因此CEC的分离柱效比HPLC高。 以上六种模式为CE基本模式，此外如亲和、免疫毛细管电泳发展趋势亦较好，这里不作一一介绍。 五 CE相关技术 1.毛细管电泳柱技术 毛细管是CE的核心部件之一．早期研究集中在毛细管直径、长度、形状和材料方面，目前集中在管壁的改性和各种柱的制备。 下面我们将做简单介绍:   1).动态修饰毛细管内壁 管壁改性主要是消除吸附和控制电渗流，通常采用动态修饰和表面涂层两类方法。动态修饰采用在运行缓冲液中加入添加剂，如加入阳离子表面活性剂十四烷基三甲基溴化铵(TTAB)，能在内壁形成物理吸附层，使EOF反向．添加剂还有聚胺、聚乙烯亚胺(PEI)等，甲基纤维素(MC)可形成一中性亲水性覆盖层。  2).毛细管内壁表面涂层 涂层方法有很多种，包括物理涂布、化学键合及交联等最常用的方法是采用双官能团的偶联剂，如各种有机硅烷，第一个官能团(如甲氧基)与管壁上的游离羟基进行反应，使其与管壁进行共价结合，再用第二个官能团(如乙烯基)与涂渍物(如聚丙烯酰胺)进行反应，形成一稳定的涂层．此外还有将纤维素、PEI和聚醚组成多层涂层，亲水性的绒毛涂层(fuzzy)和联锁聚醚涂层。 化学键合 物理吸附 3).凝胶柱和无胶筛分 CGE的关键是毛细管凝胶柱的制备，常用聚丙烯酰胺凝胶栓来进行DNA片段分析和测序。测定蛋白质和肽的分子量常用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺电泳(SDS-LPAGE)。如将聚丙烯配胺单体溶液中的交联剂甲叉双丙烯酰胺(Bis)浓度降为零，得到线性非交联的亲水性聚合物用作操