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液相色谱仪 §3-1 高效液相色谱分析法的特点 3-1-3 HPLC与GC的比较 相同：兼具分离和分析功能，均可以在线检测 主要差别：分析对象的差别和流动相的差别 1．应用范围不同 GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品， 高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物的 样品不可检测； 占有机物的20% HPLC：溶解后能制成溶液的样品，不受样品挥发性和热稳 定性的限制； 分子量大、难气化、热稳定性差及高分子和离子型 样品均可检测； 用途广泛，占有机物的80% 2．流动相差别 （1）GC：流动相为惰性气体； 组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用 HPLC：流动相为液体 流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、改善分离度增加了因素，对分离起很大作用 （2）流动相种类较多，选择余地广 流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用 （3）选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相，可以增大分离选择性 3．操作条件差别 GC：加温操作 HPLC：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小） §3-2 影响色谱峰扩展及色谱分离的因素 2. B/u —纵向扩散项Hd 3. —传质阻力项 4. 影响色谱峰扩展及色谱分离的因素 3-3-1 液-液分配色谱（liquid- liquid partitionchromatography） 固定相与流动相均为液体（互不相溶）； 基本原理：组分在固定相和流动相上的分配； 流 动 相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极 性小于固定液的极性（正相 normal phase），反之，流 动相的极性大于固定液的极性（反相 reverse phase）。 正相与反相的出峰顺序相反； 固 定 相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用； 化学键合固定相：（将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶 （担体）表面的游离羟基上。C-18柱（反相柱）。 键合相色谱 3-3-2 液-固吸附色谱 （liquid-solid adsorption chromatography） 流动相为液体，固定相为吸附剂； 基本原理：利用溶质分子占据固定相表面吸附活性中心能力 的差异；组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸; 固 定 相：全多孔型硅胶微粒 (5~10μm)颗粒小，传质 快， 柱效高 适用：于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有官能 团的化合物和异构体有较高选择性 缺点: 非线性等温吸附，常引起色谱峰的拖尾现象。 3-3-4 离子交换色谱（ion-exchange chromatography） 固 定 相：阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂； 流 动 相：阴离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液；阳离子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液； 基本原理：组分在固定相上发生的反复离子交换反应；组分与离子交换剂之间亲和力的大小与离子半径、电荷、存在形式等有关。亲和力大，保留时间长； 阳离子交换：R—SO3H+M+=R—SO3M+H+ 阴离子交换：R—NR4OH+X-=R—NR4X+OH- 应 用：离子及可离解的化合物，氨基酸、核酸等。 结构类别： （1）薄壳型离子交换树脂 薄壳玻璃珠为担体，表面 涂约1%的离子交换树脂； （2）离子交换键合固定相 薄壳键合型；微粒硅胶键 合型（键合离子交换基团） 树脂类别： （1） 阳离子交换树脂（强酸 性、弱酸性） （2） 阴离子交换树脂（强碱 性、弱碱性） 离子交换色谱法 3-3-4 离子对色谱法(反相)（ion pair chromatogra