第三章紫外-可见分光光度法概述.ppt

（1）物理性因素——难以获得真正的纯单色光 朗—比耳定律的前提条件之一是入射光为单色光。 分光光度计只能获得近乎单色的狭窄光带。复合光可导致对朗伯—比耳定律的正或负偏离。 为克服非单色光引起的偏离，首先应选择比较好的单色器。此外还应将入射波长选定在待测物质的最大吸收波长且吸收曲线较平坦处。 (2) 化学性因素 朗伯—比耳定律的假定：所有的吸光质点之间不发生相互作用；假定只有在稀溶液(c10-2mol/L)时才基本符合。 ①朗伯—比耳定律只适用于稀溶液。 ②试液中各组分之间的相互作用。 ③试剂对吸收光谱的影响。 ④试样为胶体、乳状液或有悬浮物质时的影响。 6.2紫外-可见分光光度计 可见分光光度计 紫外-可见分光光度计 一、基本组成 光源 单色器 样品室 检测器 显示 1. 光源 在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。 可见光区：钨灯作为光源，其辐射波长范围在320～2500 nm。 紫外区：氢、氘灯。发射185～400 nm的连续光谱。 2、单色器 将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出一任波长单色光的光学系统。 ①入射狭缝：光源的光由此进入单色器； ②准光装置：透镜或返射镜使入射光成为平行光束； ③色散元件：将复合光分解成单色光；棱镜或光栅； ④聚焦装置：透镜或凹面反射镜，将分光后所得单色光聚焦至出射狭缝； ⑤出射狭缝。 光栅和棱镜分光原理 3. 样品室 样品室放置各种类型的吸收池（比色皿）和相应的池架附件。吸收池主要有石英池和玻璃池两种。在紫外区须采用石英池，可见区一般用玻璃池。 4. 检测器 利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号，常用的有光电池、光电管或光电倍增管。 5. 结果显示记录系统 数字显示、微机进行仪器自动控制和结果处理。 二、分光光度计的类型 1.单光束 经单色器分光后的一束平行光，轮流通过参比溶液和样品溶液，以进行吸光度的测定。适于在给定波长处测量吸光度或透光度，一般不能作全波段光谱扫描。 2.双光束 双光束分光光度计经单色器分光后经反射镜分解为相等的两束光，一束通过参比池，另一束通过样品池。 光度计能自动比较两束光的强度，此比值即为试样的透射比，经对数变换将它转换成吸光度并作为波长的函数记录下来。由于两束光同时分别通过参比池和样品池，还能自动消除光源强度变化所引起的误差。 3.双波长 双波长分光光度计是由同一光源发出的光被分成两束，分别经过两个单色器，得到两束不同波长的单色光；利用切光器使两束光以一定的频率交替照射同一吸收池，然后经过光电倍增管和电子控制系统，最后由显示器显示出两个波长处的吸光度差值。 对于多组分混合物、浑浊试样分析，以及存在背景干扰或共存组分吸收干扰的情况下，利用双波长分光光度法，往往能提高方法的灵敏度和选择性。 6.3显色与测量条件的选择一、显色反应的选择 1.显色反应 在无机分析中，很少利用金属离子本身的颜色进行光度分析，因为它们的吸光系数值都比较小。一般都要选用适当的试剂，与待测离子反应生成对紫外或可见光有较大吸收的物质再进行测定。这种反应称为显色反应，所用的试剂称为显色剂。 ①反应的生成物必须在紫外，可见光区有较强的吸光能力，即摩尔吸光系数较大，反应有较高的选择性； ②反应生成物应当组成恒定、稳定性好，显色条件易于控制等，这样才能保证测量结果有良好的重现性； ③显色剂在测定波长处无明显吸收，显色剂与有色配合物的最大吸收波长之差（对比度），要求△? 60nm。 2. 选择显色反应时，应考虑的因素 某些元素的氧化态，如Mn（Ⅶ）、Cr（Ⅵ）在紫外或可见光区能强烈吸收，可利用氧化还原反应对待测离子进行显色后测定。 例如：钢中微量锰的测定，Mn2＋不能直接进行光度测定 2 Mn2＋ ＋5 S2O82-＋8 H2O =2 MnO4＋ + 10 SO42-＋ 16H+ 将Mn2＋ 氧化成紫红色的MnO4＋后，在525 nm处进行测定 3. 氧化还原显色反应 4.显色剂 无机显色剂：硫氰酸盐、钼酸铵、过氧化氢等几种。 有机显色剂：种类繁多 偶氮类显色剂：本身是有色物质，生成配合物后，颜色发生明显变化；具有性质稳定、显色反应灵敏度高、选择性好、对比度大等优点，应用最广泛。偶氮胂Ⅲ、PAR 三苯甲烷类：铬天青S、二甲酚橙等 1.显色剂用量 吸光度A与显色剂用量CR的关