第二章紫外-可见分光光度法概述.ppt

对于同一台仪器，读数的波动对透光率来说，基本上为一定值，但由于A的标尺刻度不是均匀的，所以A的读数波动不为定值；根据标尺可知，A?，读数波动引起的误差?，因此选择合适的吸光度范围，可减小测量结果的误差。 据L-B定律, A=-lgT=?bc 微分得到: 得到: 要使测定结果(?c/c)的相对误差最小，对上式求导应有一极小值。即： 得： A=-lgT=0.4343 或T=36.8% 说明当 A=0.4343时，得到浓度误差最小。 通过作图(?c/c-T)可进一步了解吸光度测量对结果测量的误差关系。 当透光度为15%~65% (吸光度0.2~0.8)时,浓度测量的相对偏差较小;此即分光光度分析中比较适宜的吸光度测量范围. 二.测量条件的选择 为使测定结果有较高的灵敏度和准确度，必须注意选择适当的测量条件。主要有以下几点： 1.入射光波长的选择 选择的原则：一般以被测物质的最大吸收波长作为入射光，即所谓的最大吸收原则。在此波长下测定，不仅灵敏度较高，而且测定时偏离L-B定律的程度减小(如前所述)，准确度较高。 如果共存干扰物质在?max处也有吸收，应选择待测物有吸收而干扰物无吸收的波长作入射光。即所谓的“吸收最大，干扰最小”的原则。 如图，a表示丁二酮肟镍的吸收曲线；b表示酒石酸铁的吸收曲线； 用丁二酮肟显色测定 钢中的镍，其最大吸收波 长在470nm左右；试样中的铁用酒石酸钾掩蔽,在同样波长下，也有吸收，对测定有干扰。 从图可知，当波长大于500nm时，干扰变小，所以测定时，可将入射光波长选在500nm以上。虽然灵敏度有所降低，但可消除干扰。 2.控制适当的吸光度范围 由以上讨论的光度测量误差中得知，为使测量结果的误差尽可能小，一般应控制标准溶液的吸光度在0.2~0.8范围内。从 A=?bc 的公式中可知，控制A值大小可从两个方面进行，一是调节b值；二是改变浓度c。 3.选择适当的参比溶液 在测量吸光度A时，利用参比溶液调节仪器零点，可消除溶液中其它成份以及吸收池、溶剂对光的反射和吸收所带来的误差。 如此根据试样溶液的性质，选择合适组分的参比溶液是很重要的。 (1)溶剂参比 若样品基体、试剂及显色剂均在测定波长处 无吸收，则可用溶剂作参比液(有时用蒸馏水 替代)。 (2)试样参比 若显色剂或溶剂无吸收而样品基体组分有吸 收时，则应采用不加显色剂的样品溶液作为 参比液。 (3)若显色剂、试剂及样品基体均有吸收时，则 应在样品溶液中加入适当的试剂，将被测物 掩蔽起来，使之与显色剂不再起反应，然后 依次加入显色剂及其它试剂，以此作参比液。 在光度分析实验中，有时标准曲线不过原点，其重要的原因之一就是参比液选择不当。 §2-6 定量分析法 光度分析法的定量依据是L-B定律，即在一定波长处，被测物的吸光度与其浓度呈线性关系。 因此通过测定某溶液对一定入射光波长的吸光度，即可求出该物质在溶液中的浓度和含量。 一.标准曲线法(校准曲线法或工作曲线法) 该方法是应用最多的一种方法。具体做法： 配制一系列不同含量的标准溶液，以不含被测组分的空白溶液为参比液(视具体情况而定)，测定标准溶液的吸光度。 绘制吸光度A–浓度c曲线，此曲线即称为标准曲线。 在相同条件下，测定未知试液的吸光度，从标准曲线上对应出未知试液的浓度。 在建立一个方法时，首先要确定符合L-B定律的浓度范围，即线性范围。定量测定一般在线性范围内进行。 对于常规性的测定，有时往往采用标准对比法。即在相同条件下，测定试样溶液和某标准溶液的吸光度(AX和AS)，由标准溶液的浓度CS可计算出试样中被测物的浓度Cx。 该方法将被测溶液在相同条件下和一系列不同浓度的标准溶液进行比较，颜色深浅相同者，则它们的浓度认为相同。推导如下： 对标准液和试液则分别有： 当溶液颜色相同时，说明 I标=I试 ∵两溶液为同一种物质, 则：?标=?试 设液层厚度相等, b标= b试， ∴ c标= c试 操作方法：取一套大小相同的比色管，加入系列标准溶液和相应的显色剂及缓冲溶液，然后稀释至同一刻度，形成颜色由浅至深的标准色阶。 另取一大小相同的比色管，加入被测液后按配制标准色阶的方法处理，在管底下方放置一块白板沿比色管中心垂直观察比较颜色。 该方法的优点： (1)操作简便，仪器简单，特别适用 于工厂里大批样品的分析； (2)因所用的平底比色管较长,可测定颜色淡的 稀溶液中的微量物质； (3)该方法准确度不高，相对误差约为?5~20%。 二.分光光度法 1.概述 分光光度法原理上不同于目视法，