新编仪器第四版第三章分子发光法绪论.ppt

* 二、化学发光和生物发光分析实验技术 1、偶合反应技术 发光反应 D * →D + h? A + M → C C 偶合反应 L+H2O2 2、免疫发光技术 用发光基团作为免疫标记 辣根过氧化物酶（HRP） 可催化鲁米诺体系 * 3、分离分析在线发光技术 将流动分析技术、色谱分离技术与化学发光相结合 4、电生化学发光技术 通过电极反应诱发溶液化学发光 * 第六节 分子发光分析法应用简介 一、分子荧光分析法的应用 1、无机化合物的荧光分析 待测元素与有机试剂生成具有荧光特性的配合物 （Ca2+ Mg2+ Na+ K+ Zn2+，F- Cl- Br- I-） 2、有机化合物的荧光分析 生物活性物质、药物、农药、食品 二、分子磷光分析法的应用 三、化学发光分析法的应用 * 1.电子受激发跃迁到激发态后，返回基态的过程中，有哪些释放能量的途径 2.荧光光谱的特征？ 3.产生荧光必须具备的条件? 4.影响荧光强度的因素? 5.测量荧光的仪器的组成及特点？ 6.化学发光分析的主要类型 本章小结 * 主要类型 1）自猝灭 M *+ M→ Mn 2）电荷转移猝灭 M（甲基蓝） M * M +λem（荧光） λex M *+Fe2+ M -+Fe3+ I-＞CNS-＞ Br-＞ Cl-＞ C2O42-＞ SO42- ＞ NO3- ＞ F- 猝灭的强弱顺序 * 3）转入三重态的淬灭 含溴化物、碘化物、硝基化合物、重氮化合物、羰基化合物及某些杂环化合物容易转变为三重态， 因而易使荧光淬灭,氧的存在会增强系间窜跃。 S1 T1 4）光化学反应 某些光敏物质吸收光辐射后，发生了化学反应或预离解 * 5、表面活性剂的影响 当单体表面活性剂浓度增大到临界胶束浓度， 会缔合为球状胶束，对荧光物质起到保护作用 4、温度、酸度和溶剂的影响 * 特点 1.灵敏度高 比紫外-可见分光光度法高2～4个数量级； 检测下限：10-10~10-12g/ml 2.选择性强 既可依据特征发射光谱，又可根据特征激发光谱； 3.试样量少 缺点：应用范围小。 五、荧光定量分析方法 * 定量依据与方法 定量依据 方法 工作曲线法 比较法 荧光猝灭法 多组分混合物荧光分析 a无相互干扰，分别测定 b有干扰，同紫外－可见吸收光谱定量方法 解联立方程组法 等吸收双波长消去法 * 荧光分析注意事项 a.防止荧光污染 器皿、溶剂、洗涤剂、滤纸、润滑油等 b.防止散射光的干扰 丁铎尔散射光、瑞利散射光、拉曼散射光的干扰 可通过选择合适的测定波长，滤光片等手段加以消除 * 六、 荧光分光光度计 国产970CRT型 * 1.仪器主要部件： 激发光源、双单色器系统、样品池、检测器 特殊点：有激发和发射两个单色器，光源与检测器通 常成直角。 光源：氙灯（250~800nm） 单色器： 选择激发光波长的第一单色器 选择发射光(测量)波长的第二单色器； 样品池：石英比色皿 (四面透光) 检测器：光电倍增管。 * * 2.仪器的灵敏度 规定：在特定条件下能检出0.05mol/LH2SO4介质中硫酸奎宁的最低浓度为灵敏度。 灵敏度：10-10~10-12g/mL 绝对灵敏度 * 第三节 分子磷光分析法 磷光现象：T1 S0 主要有：低温磷光分析、室温磷光分析 * 一、低温磷光分析 试样溶于有机溶剂 刚性玻璃状物 测磷光 77K（液氮） 防止分子间碰撞 溶剂条件： 易于制备、提纯 溶解能力强（很好的溶解分析物） 在77K下有足够黏度并能形成刚性玻璃体 背景低，在所研究的光谱区无明显吸收，发射 * 二、室温磷光分析 将试样固定在滤纸、硅胶、Al2O3、玻璃纤维、淀粉KBr等基体上，以增加其刚性，减少三重态碰撞猝灭，增加强度。 胶束稳定的溶液室温磷光分析（MS-RTP） 环糊精室温磷光（CD-RTP） * 第四节 化学发光分析法 化学发光 (CL) ：由化学反应的能量把分子激发,从激发态返回到基态，产生光辐射的现象。 化学发光分析法：依据待测物浓度与体系的化学发光强度的关系，确定待测物含量的一种痕量分析方法。 特点：灵敏度高、线性范围宽、设备简单、分析速度快 易实现自动化 * 一、化学发光分析的基本原理 1、化学发光反应的基本条件 发光反应必须满足以下条件 a. 化学反应必须产生足够的化学能，且被发光物质吸收形成电子激发态。 在紫外可见光区观察化学发光，160~420kJ·mol-1激发能。化学反应多是在有O3、H2O2等参加的高能反应。 b. 处于激发态分子