OXYGRAPH氧电极使用方法分解.pptVIP

Oxygraph 液相氧电极使用方法 ? ; 一、氧电极的基本配置 二、氧电极的准备 三、氧电极测定系统的安装 四、氧电极的校正 五、氧电极敏感性的测试 六、样品的测定 七、注意事项 ;一. 氧电极的基本配置;氧电极控制盒背面;;;二. 氧电极的准备;注 意！; ① 在圆形电极的顶部加1小滴电解液。电解液为半饱和的氯化钾溶液。 ② 取一块长约为3.5cm、宽约为0.5cm 的长形盐桥纸片覆盖在电解液上，并且至少使一角在电极的凹槽内担当盐桥的作用。然后取一块电极膜覆盖在盐桥纸片上面。所用的簿膜必须无洞、无皱折，不能用手接触。;;三. 氧电极测定系统的安装;1.氧电极系统的安装;电极反应室安装方法;; ② 将安装好的电极室安置在控制盒上方的黑色磁力搅拌器上。 ③ 用电极连接线将电极与控制盒连接（一端插在控制盒的“INPUT”插口，另一端插在电极的SMB控制器上），为电极提供极化电压。 ④ 在反应杯中准确加入一定量的蒸馏水（0.2～2.5ml），然后放入磁转子。; ;2.电极控制盒与计算机的连接;3.控制软件的安装;四. 氧电极的校正; 在提示框中输入实验时的温度和大气压，然后点击“OK”进行下一步操作。;注 意 ！;; 在屏幕记录一条被空气饱和的去离子水中的氧含量信号线。提示框中“Signal”为来自电极的信号；“Rate”为信号的变化速率。当信号线平稳， 将显示“Plateau reached, press OK to…”的提示。;点击OK，屏幕上显示建立零氧线的提示。 ;② 建立零氧线 当屏幕上显示“Establish zero Oxygen In the chamber”时，通过反应杯盖的排气孔用注射器加入高浓度的连二亚硫酸钠溶液（现用现配）。然后点击提示框上的“OK”进行下一步操作。; 这时屏幕上的踪迹信号线下降，由于反应杯中的氧气与连二亚硫酸钠反应，将溶液中的氧气消耗掉，电极附近的氧气下降为零。理想的电位信号（踪迹信号线）应该为零，但实际上无氧时也总有一些小的残余电流（残余信号）发生。当踪迹信号线稳定后，屏幕上将显示以下提示：;-0.1; 确定校正无误，点击“Save”保存校正结果。然后显示以下窗口：;点击“OK”，完成校正。; 1.取充分搅拌后被空气饱和的水加入反应杯中，启动磁转子进行平衡。然后点击 按钮进行记录，得到记录信号。 2.点击 关闭磁转子停止搅拌，这时记录信号下降，这是因为靠近电极膜水层的氧被耗尽的缘故（见下图）。; 3.重新启动转子，这时记录信号上升，因为在转子的搅拌下，反应杯中的水又重新达到了平衡。记录信号应该稳定在关闭磁转子之前的水平。如果磁转子稳定在一个中间水平，说明转子的转速不够，应该增加转子的转速。如果在测试过程中电极没有反应，很可能是在电极的准备过程中有问题，或者电极与控制盒的连接有问题。;六. 样品测定;（2）样品放/耗氧速率的计算;;选取参与计算的时间段后，点击鼠标右键，显示以下窗口：;点击“Add”，所选择时间段氧的变化速率被添加到变化速率表（Rates of Change Table）。;点击“Normalize factor”，显示“Dialog”窗口;在“Dialog”窗口中输入相应的校正因子（样品重量或面积及反应杯中样品液的体积），便可将氧的变化速率单位自动换算成标准的光合速率或呼吸速率单位。;蓝色框内的数据为输入校正因子后计算出的光合/呼吸速率;七. 注意事项; 4.氧电极对温度变化非常敏感，测定时需维持温度恒定。如果反应杯中出??气泡，则表明溶液尚未与测试条件下的环境温度达到平衡。 5.反应杯中不应有气泡，否则会造成信号不稳，有经常性的随机干扰，使记录线扭曲。因为气泡中的含氧量比水中高20多倍，反应杯中有气泡时溶液中的氧就会扩散到气泡或气泡中的氧扩散到溶液中，结果会造成电极反应迟纯。空白测定时，信号会出现缓慢漂移。; ; 8.由于反应杯中的溶液体积要参与耗/放氧速率的计算，因此每次测定时一定要准确加入定量的液体，如果要在液体中加入固体样品，加入样品后，调节电极室上的旋钮，使溶液刚好进入旋钮中的小孔中，使反应杯中无气泡。不可将旋钮旋得过深使反应杯中的溶液从小孔中溢出而影响测定液的体积。; 9.用注射器向反应杯中加溶液（小样品、抑制剂或激活剂）时，应注意针头和注射器中的样品溶液无气泡。使用的注射器针头不要过长，以免损坏电极膜。 10.由于磁转子比较小，清洗反应杯时，注意不要将磁转子倒掉。;未加抑制剂前;未加抑制剂前;未加亚油酸钠前;LOX酶活性测定