03-硕士研究生课-后基因组学-章跃陵- 基因组测序,序列组装,基因鉴定.ppt

Chaper 3 结构基因组学的核心研究技术——基因组测序、序列组装与基因的鉴定;;一、 DNA测序的基本方法 ;1、 链终止法测序(the chain termination method) ;;2）技术路线与要求;;2 化学降解法测序（Maxam和Gibert于1977年发明） ;2）技术路线;①先用限制性内切酶把DNA切成10-200bp 的测序材料； ②用碱性磷酸化酶处理该片段，消除5′末端上的磷酸； ③在5′OH端标记 32P，用多核苷酸磷酸激酶催化； ④标记片段变性为单链； ⑤用特异的化学试剂作用于不同的碱基进行修饰，然后用哌啶切断反应碱基的多核苷酸链，紧接着用四组不同的特异反应可以使末端标记的DNA分子切成不同长度的片段， 产生一组其末端都是该特异碱基的长度不等的DNA片段； ⑥经电泳和放射性自显影后，从4个反应系统统一阅读，待测DNA的全部核苷酸序列就可直接读出。 ;;● 测序流程;3 自动化测序;2）基本流程;3）自动化测序结果;4 、非常规测序及未来测序方法 ;;2）单分子测序法(single-molecule seguencing);3）DNA芯片测序 ;利用基因芯片进行杂交测序的原理; 新型的电离技术如电喷雾离子化和基质辅助激光吸收技术使利用质谱法分析大片段DNA 成为可能，其中四极离子捕获效果更好。Fourier转型质谱或飞行时间质谱可进行极为敏感