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色谱分析 -----研究生 主讲: 赵怀清 第一章 色谱分析法概论 第一节 色谱法概述 一、什么是色谱法 色谱分析法简称色谱法 chromatography ，是一种物理或物理化学分离分析方法。 图示 固定相——CaCO3颗粒 流动相——石油醚 第二节 色谱法的分类与历史 一、色谱法的历史 1.新型固定相和检测器的研制 2.色谱新方法的研究 3.色谱联用技术 4.色谱专家系统 二、分类： 1．按两相分子的聚集状态分： 流动相 固定相 类型 续前 2．按操作方式分： 3．按分离机制分： 图示 色谱法简单分类 第二章 色谱基本理论 定性参数 定量参数 柱效参数 分离参数 相平衡参数 续前 （一）色谱流出曲线和色谱峰 1．色谱流出曲线　是由检测器输出的电信号强度对时间作图所绘制的曲线，又称为色谱图。 2．基线　是在操作条件下，没有组分流出时的流出曲线。 3．色谱峰　是流出曲线上的突起部分。 正常色谱峰为对称形正态分布曲线。 不正常色谱峰有两种：拖尾峰和前延峰。 色谱峰的对称与否可用对称因子fs symmetry factor ，或叫拖尾因子 tailing factor ，来衡量。 对称因子在0.95～1.05之间的色谱峰为对称峰； 小于0.95者为前延峰。 大于1.05者为拖尾峰。 二、定性参数 （一）保留值 1．保留时间 retention time；tR 是从进样到某组分在柱后出现浓度极大时的时间间隔，即从进样开始到某个组分的色谱峰顶点的时间间隔。 2．死时间 dead time；t0 是分配系数为零的组分，即不被固定相吸附或溶解的组分的保留时间。 3．调整保留时间 adjusted retention time； 5．死体积 dead volume；V0 6．调整保留体积 adjusted retention volume； 与流动相流速无关 7．相对保留值 relative retention；r 　 8．保留指数 retention index；I 又称Kovats指数，定义式如下： 规定正己烷、正庚烷、正辛烷的保留指数分别为600、700、800，依次类推。 同系物中，每增加1个CH2，保留指数增加100。 例如 在阿皮松柱上，测定某样品的保留指数，测得数据如下： tR t0 样品 乙酸正丁酯 340s 30s 物质对 正庚烷 Z 204s 正辛烷 Z+n 403.4s 三、柱效参数 （一） 色谱峰区域宽度 1．标准差 standard deviation；σ 是正态色谱流出曲线上两拐点间距离之半。 σ越大，组分越分散；反之越集中。 2．半峰宽 peak width at half height；W1/2 是峰高一半处的峰宽。 W1/2 2.355σ 3．峰宽 peak width；W 是通过色谱峰两侧拐点作切线在基线上所截得的距离。 W 4σ 或 W 1.699W1/2 （二）理论塔板数和理论塔板高度 1. 理论塔板数 2. 理论塔板高度 四、分离参数 若R 1， 4σ分离， 两峰基本分开。 若R 1.5，6σ分离，两峰完全分开 基 线分离 。 2.基本分离方程式 （1）柱色谱 a项取决于柱效，n↑，a项↑ b、c项相关 在GC中： b项主要受色谱柱性质影响 c项主要受柱温影响 在HPLC中： b项主要取决于流动相的种类 c项主要取决于流动相的配比 （2）薄层色谱： 讨论： ① a项为薄层板板效项。N↑，斑点越集中，R↑。 ②b项为选择项。选择合适的流动相，提高α。 ③c项为容量项。Rf2↑，R↓。 最佳分离条件：Rf值在0.3~0.5。调整展开剂极性，使Rf值落入最佳范围。 （二）有效峰数（effective peak number,ENP ENP的含义：在含有Z与Z+1个碳的正构同系物的色谱峰间能容纳的色谱峰数。 ENP越大，色谱柱的分离性能越好。 例如：在一个20m0.24mm内径的WCOT柱，固定液为Carbowax 20M，柱温80℃，测定正构醇同系物得：正戊醇、正己醇和正庚醇的保留时间分别为：554.0，870.6和1459.2s，色谱峰宽分别为：7.54，12.03和20.40s。 用正戊醇、正己醇的数据计算ENP （三）分离值 1.分离值在柱色谱中的定义和含义 例1 若RZ+1/Z 6，R*＝1.5，则SV 3. 说明在含有Z与Z+1个碳的同系物的色谱峰间能容纳3个色谱峰。 例2 若RZ+1/Z 6，R*＝1.0，则SV 5. 说明在含有Z与Z+1个碳的同系物的色谱峰间能容纳5个色谱峰。 2.在薄层色谱法中的定义和含义 R