现代光分析-4答题.pptVIP

第五节 荧光仪器;分析工作者必须对所使用的荧光仪器有所了解。 （1）荧光法是一种高灵敏度的分析方法，需要放大信号，这种光学信号中除荧光外，还有其他光信号（仪器漏光、各种散射光）。故需要区分荧光和干扰光。 （2）现使用的荧光仪不是理想的仪器，所测定的光谱仅为表观光谱。故需要了解荧光仪的性能。;;LS55;荧光分析仪器与紫外-可见分光光度计的基本组成部件相同，即有光源、单色器、样品池、检测器和记录显示装置五个部分。荧光仪器的单色器有两个，分别用选择激发波长和荧光发射波长。除了基本些部件的性能不同外，荧光仪器与紫外-可见分光光度计的最大不同是，荧光的测量通常在与激发光重直的方向上进行，以消除透射光和散射光对荧光测量的影响。其结构示意图如图14.9所示。; 荧光仪结构;;;荧光仪器的单色器有两个，分别用选择激发波长和荧光发射波长。除了基本些部件的性能不同外，荧光仪器与紫外-可见分光光度计的最大不同是，荧光的测量通常在与激发光重直的方向上进行，以消除透射光和散射光对荧光测量的影响。; 与紫外-可见分光光度计的主要差别;理想的荧光仪：;表观荧光光谱 ? 校正荧光光谱;?/nm;氙灯 外套为石英，内充氙气，室温室时压力为5 atm，工作时约为20 atm。 可见，氙灯在平时或工作时处于高压状态，存在爆炸的危险。安装时应带上安全眼镜，防止以外。 报废的氙灯应裹上厚纸，并把石英管敲碎，以免留下隐患。;氙灯 是短弧气体放电，发射出450 nm的线光谱。光强度很大（工作者应避免直视光源）。 500 W的氙灯电流为25 A。 寿命：2000 h、4000 h 闪烁氙灯：20000 h 使用于光敏物质。;　　①辐射光谱能量分布与日光相接近,色温约为6000K。 　　②连续光谱部分的光谱分布几乎与灯输入功率变化无关，在寿命期内光谱能量分布也几乎不变。 　　③灯的光、电参数一致性好，工作状态受外界条件变化的影响小。 　　④灯一经燃点，几乎是瞬时即可达到稳定的光输出；灯灭后，可瞬时再燃点。 　　⑤灯的光效较低，电位梯度较小。 ;2、汞灯;低压汞灯点燃时汞蒸气压小于一个大气压，此时汞原子主要辐射波长为253.7nm的紫外线。常用的“日光灯”灯管内壁涂以卤磷酸钙荧光粉，再将紫外线转变为可见光。节能型荧光灯内壁涂有稀土荧光粉，发光效率更高。 高压汞灯点燃时汞蒸气压为2～5个大气压，内管用石英玻璃。高压汞灯辐射的紫外线光谱加宽，且偏蓝绿，可用于光化反应、光刻机、紫外线探伤及荧光分析等。 360 nm最强;激光是目前获得的最单色的单色光，激光器可分为气体激光器、固体激光器、半导体激光器和染料激光器等四大类。激光波长可覆盖从微波到X射线的广阔波段。;将光源产生的复合光色散成单色光;棱镜：依据不同波长光通过棱镜时折射率不同.;在镀铝的玻璃表面刻有数量很大的等宽度等间距条痕(600、1200、2400条/mm ) 利用光通过光栅时发生衍射和干涉现象而分光.;;光栅单色器的两个主要指标： 色散能力 杂散光水平;狭缝 出射光的强度约与狭缝的平方成正比，增大狭缝的宽度有利于提高信号强度，缩小狭缝宽度有利于提高光谱分辨率。; 三、液池 用于盛待测及参比溶液. 可见光区：光学玻璃池 紫外区：石英池 ;普通玻璃的主要成分是硅酸钠， 而石英玻璃的主要成分是二氧化硅。;四、检测器 利用光电效应，将光能转换成电流讯号 光电池、光电管、光电倍增管、二极管阵列;检测器;光电管;光电倍增管（160-700 nm）;光电倍增管;侧窗管;光电倍增管的响应曲线;PMT的线性响应： PMT的阳极电流要正比于光强度;APD (Avalanche Photo Diode) ;二极管阵列;CCD，英文全称：Charge-coupled Device，中文全称：电荷耦合元件。可以称为CCD图像传感器。CCD是一种半导体器件，能够把光学影像转化为数字信号。 CCD上植入的微小光敏物质称作像素（Pixel）。一块CCD上包含的像素数越多，其提供的画面分辨率也就越高。CCD的作用就像胶片一样，但它是把图像像素转换成数字信号。CCD上有许多排列整齐的电容，能感应光线，并将影像转变成数字信号。经由外部电路的控制，每个小电容能将其所带的电荷转给它相邻的电容。;荧光仪的验收;荧光分光光度计灵敏度： （1）既有以水的拉曼散射信噪比50. 397 nm 水的拉曼峰。 （2）硫酸奎宁检出限为0.05 ppb. 450 nm 奎宁荧光峰。;荧光仪器的灵敏度;;;;;荧光显微镜在生物学和医学领域已得到了广泛应用，是观测细胞形态、结构和生命现象的有力工具。荧光显微镜作为一种必不可少的分析手段，常用于定性观察细胞内部荧光物质的空间分布和强度分布，得到细胞的荧光图像，研究细胞的结构。