04第四章植物组织培养技术(二)讲述.ppt

第三节 植物离体繁殖; 植物离体繁殖（propagation in vitro）又称植物快繁或微繁，是指利用植物组织培养技术对外植体进行离体培养，使其短期内获得遗传性一致的大量再生植株的方法。;1、繁殖效率高。 2、培养条件可控性强。 3、占用空间小。 4、管理方便，利于自动化控制。 5、便于种质保存和交换。;二、植物快繁器官形成方式（再分化形成植株的方式） ;（一）短枝发生型（不定芽型）;;*;（三）器官发生型（已讲过） 是指外植体在适宜培养基和培养条件下，经过脱分化形成愈伤组织，然后经过再分化诱导愈伤组织产生不定芽，或外植体不形成愈伤组织而直接从其表面形成不定芽，将芽苗转移到生根培养基中，经培养获得完整植株的繁殖方法。 ①繁殖速度较快。②遗传性不稳定，已产生变异。③愈伤组织是遗传转化、细胞培养或原生质体培养的良好材料 ;器官发生型也是许多植物快繁的主要方式。由于不定芽形成的数量与腋芽数目无关，其增殖率高于丛生芽发生型。 但经过愈伤组织途径或者多次继代培养后，容易导致细胞分裂不正常，增加变异植株发生频率。如香蕉继代次数控制在8代之内，再生植株的变异率则可控制在3%左右。;表现嵌合性状的植株通过此方式再生时，往往导致嵌合性状发生分离而失去原有价值。如观赏植物色彩镶嵌的叶子、带金边或者银边等性状的植物，通过器官发生性途径再生植株时，可能导致这些观赏性状消失。这类植株快繁时，应通过丛生芽途径进行。;A ;（四）胚状体发生型;胚状体发生型 特点：①胚状体发生数量多、速度快、结构完整、繁殖系数高。②遗传性稳定;菊花花瓣体细胞胚胎发生及体胚发育过程的扫描电镜观察;（五）原球茎发生型;原球茎是兰花种子发芽过程中的一种形态学构造。种子萌发初期并不出现胚根，只是胚逐渐膨大，以后种皮的一端破裂，肿胀的胚呈小圆锥状，故称为原球茎。 原球茎是短缩的、呈珠粒状的、由胚性细胞组成的、类似嫩茎的器官，它可以增殖，形成原球茎丛。由茎尖或腋芽外植体诱导产生原球茎，切割原球茎进行增殖，或停止切割使其继续培养而转绿，产生毛状假根，叶原基发育成幼叶，将其转移培养生根，形成完整植株。 ;*;植物快繁的程序包括四个阶段： 无菌（或初代）培养的建立 繁殖体增殖 芽苗生根 小植株的移栽驯化;;*;;2.增殖培养基 增殖率是植株快速繁殖特别是商业性繁殖的重要指标。外植体在每次继代培养中，应能产生最大数量的有效繁殖体。 基本培养基一般与启动生长培养基相同，而细胞分裂素和矿物元素的浓度水平则高于启动生长培养基。一般MS+BA 1~3 mg/ml+NAA0.1~1 mg/ml。 ;3.增殖体的大小和切割方法 一般携带一个茎节，但第一次增殖的茎段一般都有2~4个茎节。 茎段可以垂直插入培养基中，但插入的深度不应淹没茎节；或水平放入培养基表面，以刺激侧芽的萌动。 ; 青花菜增殖;*;*;;*;2.活体生根（试管外生根） 芽苗先在生长素中快速浸蘸或在含有相对高浓度生长素的培养基中培养5~10天，然后在温室中栽入培养基质，经常喷雾，给予高湿度环境，几天后便可自行生根。 ;;１.移栽 ;2.驯化管理;移栽小植株还应注意光、温控制。 移栽初期光照强度应较弱，经过一段时间适应后，增加光照强度（漫射），如1 500～4 000 lx，甚至10000 lx。 移栽小植株生长所需的适宜温度与植物种类有关，喜温性植物以25℃左右为宜，喜凉性植物则以18～20℃为好。温度过高导致蒸腾作用加强，水分失衡，微生物滋生等；温度过低则使幼苗生长迟缓或不易存活。如使基质温度高于空气温度2～3℃，则有利于生根和促进根系发育，提高存活率。;此外，在移栽小植株的驯化管理阶段，还应防止菌类滋生，适当喷一定浓度的杀菌剂（杀菌灵）可有效保护移栽小植株的正常生长。;*;;;;;四、继代培养;五、移栽;;园艺植物种苗工厂化生产; ;;;;;;;;;;;;兰科植物生产;无菌苗快速繁殖;无菌苗驯化;*;;;1.污染概念：在组培过程中培养基和培养材料滋生杂菌，导致培养失败的现象。 2.污染原因：细菌、真菌为病源菌；污染途径有外植体带菌，培养基及器皿灭菌不彻底，操作人员未遵守操作规程，环境不清洁。 ;（1）真菌污染的特点：污染部分长有不同颜色的霉菌，在接种后3～10天才能发现。（真菌菌落大，颜色多样，表面呈毛绒状，嗅之一般有霉味，真菌会产生菌丝） 原因：周围环境不清洁 超净工作台的过滤装置失效 培养用器皿的口径过大等 为了减少损失，提高工作效率，必须在每个操作环节注意防止污染的发生。 ;（2）细菌污染的特点：菌斑呈粘液状物，而且在接种后1～