无菌知识培训.pptx

无菌知识一.无菌相关的概念1.无菌：是指物体或任一介质中没有活的微生 物的存在，即无论用何种方法，检不出活的微生物。2.无菌操作：指在操作中，采用或控制一定的条件，尽量避免产品污染微生物的一种操作方法程序。为此目的，所用的一切物料环境，均应事先灭菌，操作也应在无菌操作室中进行。3.无菌观念：指在无菌操作时，避免污染任何微生物。“无菌”从定义上来说是一个绝对的概念，但遗憾的是，科学和计数高度发展的今天，药品的绝对无菌即做不到，也无法加以证实。然而，无菌制剂的安全性要求人们设定无菌的相对标准。FDA、欧洲制药工业界曾将百分之一微生物污染率作为美军产品“无菌”的相对标准，它和蒸汽灭菌后产品中微生物存活的概率为10-6（即产品的无菌保证值为6），系同一标准的不同表示法。这一标准于1980起收录于USP中，如今已为世界各国普遍接受和采用。二、细胞培养污染与检测细胞污染的种类可分成细菌、真菌、支原体和病毒。无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染的血清和污染的细胞等是主要的污染源。严格的无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好的细胞来源和培养基配制是减低污染的最好方法。细胞培养过程中的主要细胞污染有：1、细菌污染2、真菌污染3、支原体污染4、病毒污染5、黑胶虫污染1、细菌污染（1）什么是细菌：细菌是一类细胞细短、结构简单、胞壁坚韧、多以二分裂方式繁殖和水生性较强的原核生物。（2）细菌分类：可根据形状分为三类，即：球菌、杆菌和螺旋菌（包括弧菌、螺菌、螺杆菌）。按细菌的生活方式来分类，分为两大类：自养菌和异养菌，其中异养菌包括腐生菌和寄生菌。按细菌对氧气的需求来分类，可分为需氧（完全需氧和微需氧）和厌氧（不完全厌氧、有氧耐受和完全厌氧）细菌。按细菌生存温度分类，可分为喜冷、常温和喜高温三类。 也可经革兰氏染色法染色将细菌分为两大类：一类最终染成紫色，称为革兰氏阳性细菌（G+），另一类被染成红色，称为革兰氏阴性细菌（G-）（3）生存条件：凡在温暖、潮湿和富含有机物质的地方，都有各种细菌活动之处。所需条件有： ①温度 ：在一定温度范围内，细菌的代谢活动和生长繁殖随着温度的上升而加快。当温度升高到一定限度，开始产生不良影响时，如果温度继续升高，细菌的细胞功能就会受到破坏，以致造成死亡。0℃停止生长，在-20℃不会死亡 。 ②空气湿度：65%~75% ③水分和空气相对湿度：一般适合食用菌菌丝生长的培养料含水量在60％左右。 ④空气：微量的CO2浓度(0.034％~0.1％) ⑤光照：光照强度为250~1000 Lux 5 ⑥pH值：喜偏酸性环境，菌丝生长的pH值在3~6.5之间，最适pH值为5.0~5.5。大部分细菌在pH值大于7.0时生长受阻，大于8.0时生长停止。（4）细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染，最常见的细菌污染主要有枯草杆菌、大肠杆菌等革兰氏阴性菌，白色葡萄球菌也较常见。（5）细菌污染后，培养液pH改变，培养液变得明显混浊，也有的对培养液无肉眼可见影响，只在镜下观察发现菌体时才知已污染，应仔细观察。2、真菌污染（1）什么是真菌：真菌是具有真核和细胞壁的异养生物，具有叶绿体但是无叶绿素不能进行光合作用，具有发达的菌丝体，异样吸收营养，以产生大量无性和（或）有性孢子的方式进行繁殖。大多数真菌生长很快，而只有占少数的致病性真菌生长较慢。（2）常见的主要有酵母菌、霉菌、烟曲霉、黑曲霉、孢子菌、白色念珠菌等（3）生存条件真菌的生长和繁殖受许多理化因素的影响　①温度是最能影响真菌生长繁殖的因素。一般能容许真菌生长的最低温度为0-5℃，最高为40-45℃，最适宜浅部真菌生长的温度为22-28℃，最适宜深部真菌生长的温度为37℃。　②真菌的生长繁殖需要一定的湿度，一般真菌在中等湿度时生长较好。　③真菌略偏嗜酸性，在PH5-7之间生长最好。　④绝大多数真菌生长时需要氧气，但需氧量不等。高压氧能抑制真菌生长，但不会至死。在氧供应减少时真菌生长缓慢。二氧化碳对皮肤癣菌生长不利，但在一定条件下能刺激某些真菌的孢子形成。　⑤真菌的生长需要营养成分，碳、氮、某些维生素和某些微量元素都是真菌生长所不可缺少的。（4）真菌污染在细胞培养中较常见。真菌种类繁多，形态各异，但污染后易发现，肉眼可见培养基中漂浮着白色或浅黄色的小点，有的呈散在生长，但培养基一般不发生浑浊。倒置显微镜下观察可见丝状、管状或树枝状的菌丝纵横交错于细胞之间或培养基中，有的呈链状排列。3、支原体污染（1）什么是支原体：又称霉形体，是一类无细胞壁、介于独立生活和细胞内寄生生活的最小型原核生物（2）繁殖方式多样，主要为二分裂繁殖，还有断裂、分枝、出芽等方式，盖因缺乏细胞壁造成分支原体标本裂时二个子细胞大小均所致。同时，支原体分裂和其DNA复制不同步，可形成多核长丝体。（3）生产条件：营养要求比一般细