蛋白质的基本实验方法汇编.ppt

Western Blot Western Blot A. Sample preparation B. Electrophoresis C. Transfer of proteins and staining (Western blotting) 蛋白裂解液的制备 SDSSample SDSSDSElectrophoresis Western Blot 免疫共沉淀 当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。 SDS在浓缩胶运动中，Clˉ解离度大，Proˉ解离度居中，甘aaCOOˉ解离度小，迁移顺序为（PH6.8）Clˉ Proˉ —COOˉ，一个Clˉ领路，—COOˉ推动，蛋白在中间，这样就起到浓缩的作用了。 由于胶联度小，孔径大，Proˉ受阻小，因此不同的蛋白质就浓缩到分离胶之上成层，起浓缩效应，使全部蛋白质处于同一起跑线上。 当蛋白质进入分离胶时，此时Proˉ，Clˉ，甘