GSTpulldown操作规程.docVIP

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2017-06-07 发布于重庆
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GSTpulldown操作规程.doc

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GSTpulldown操作规程

GST-pulldown操作流程实验目的：体外检测蛋白质与蛋白质之间相互作用。用于验证两个已知蛋白的相互作用，或者筛选与已知蛋白相互作用的未知蛋白。实验原理：利用重组技术将探针蛋白与GST（Glutathione S transferase）融合，融合蛋白通过GST与固相化在载体上的GTH（Glutathione）亲和结合。因此，当与融合蛋白有相互作用的蛋白通过层析柱时或与此固相复合物混合时就可被吸附而分离。539134），Immobilized Glutathione（PIERCE 15160）实验操作程序：材料及试剂探针蛋白与GST10：40ul 5×loading buffer溶解beads上的蛋白，煮沸3分钟，高速离心，Run –SDS PAGE做Western Blot检测。用HA或者myc Blot。 Laboratory of Molecular Neurobiology State Key Laboratory of Biotherapy xq GST GST-CamKIIα 34kd 49kd Ponceau s staining - + - + + - - + - - - + - + + - + - + - - - + - GST GST-CamKIIα Orai1 Orai1S263A Exposure 1’ WB: myc