环介导的恒等温扩增技术---张建立研讨.pptxVIP

环介导的等温扩增技术（LAMP） 普通PCR PCR的基本步骤 变性：高温使双链DNA解离形成单链（94℃,30s）。 退火：低温下，引物与模板DNA互补区结合（ 55℃,30s ）。 延伸：中温延伸。DNA聚合酶催化以引物为起始点的DNA链延伸反应（70~72 ℃,30~60s）。 PCR的基本步骤 环介导的等温扩增技术（LAMP） LAMP简介 环介导的等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification，LAMP）是2000年由日本研究人员Notomi等人发明的一种新型的体外等温扩增特异核酸片段的技术。 该技术主要是利用两对特殊设计的引物和具有链置换活性的DNA聚合酶，使反应中在模板两端引物结合处循环出现环状单链结构，让引物可以在等温条件下（约65℃）顺利结合上去进行链置换扩增反应，客服了传统PCR反应需要通过反复的热变形过程获得单链模板的缺点，并大大节省了反复升降温度的时间，从而实现在恒温条件下进行连续的快速扩增。 LAMP与PCR方法对比 LAMP引物简介 LAMP扩增原理 LAMP扩增的三个阶段： 循环模板合成阶段 循环扩增阶段 伸长和再循环阶段 LAMP扩增产物的检测 琼脂糖电泳检测 普通PCR结果 LAMP结果 LAMP扩增产物的检测 焦磷酸镁浊度检测 荧光目测比色法检测 2.a 2.b 3.a 3.b LAMP技术特点 优