第三章抗体技巧.ppt

1.掌握抗体和免疫球蛋白的概念，免疫球蛋白的结构及其与功能的关系； 2.掌握五类免疫球蛋白的特性和功能特点； 3.掌握抗体的生物学活性； 4.了解单克隆抗体； 1890年，Behring 和北里在德国Koch实验室从豚鼠体内发现了第一种抗体：白喉抗毒素，从而挽救了成千上万的白喉患儿，死亡率从60%降到26%。 获1901年的第一届诺贝尔奖。 可变区：抗体分子中轻链和重链靠近N端的氨基酸序列变化较大，形成的结构域称为可变区（V区），分别占重链和轻链的1/4、1/2。重链和轻链的V区分别称为VH和VL. 恒定区：靠近C端的氨基酸序列相对恒定的区域称为恒定区（C区）.重链和轻链的C区分别称为CH和CL. 高变区（hypervarible region，HVR）或互补决定区( complementary determining region, CDR) VH和VL各有3个区域的氨基酸组成和排列顺序高度可变，共同组成Ig的抗原结合部位，识别并结合抗原。 骨架区：V区中CDR之外区域的氨基酸组成和排列顺序相对变化不大，称为骨架区(FR)．VH或VL各有4个骨架区，分别用FR1、FR2、FR3和FR4表示。 铰链区 位于CH1与CH2之间，含有丰富的脯氨酸，因此易伸展弯曲，能改变两个结合抗原的Y形臂之间的距离，有利于两臂同时结合两个抗原表位。而且易被木瓜蛋白酶、胃蛋白酶等水解，产生不同的水解片段。 免疫球蛋白的基本结构 “Y”型，四肽链 重链 （5种: ?、?、?、?、?） 轻链 （2种: ??、??） 可变区 （V区） 高变区:（HVR，3个，又称CDR 互补决定区） 骨架区: FR（4个） 恒定区 （C区） 铰链区 其他成分 1、能与肥大细胞表面的FcR结合、并介导I型超敏反应的免疫球蛋白是（） 2. 分子量最大的一类免疫球蛋白是（） 3、在局部黏膜感染免疫中发挥重要作用的是（） 4、具有J链的免疫球蛋白是（） 5、正常人血清中含量最高的免疫球蛋白是（） 6.接种疫苗后首先产生的抗体是（） 7. Ig M的实际抗原结合价一般是（） 8. Ig G的铰链区位于（）和（）之间 1、抗体分子中与抗原特异性结合的部位是（） A CHCL B VHCL C VHCH D VLCL E VHVL 2、下列关于Ig G的叙述错误的是（） A 可分为四个亚类 B 可通过胎盘 C 抗原结合价为二价 D CH2区有补体结合位点 E 经木瓜蛋白酶水解后可获得一个F（ab）2片段 3、成熟B细胞表面Ig主要的类别是（） 单克隆抗体（monoclonal antibody，mAb） 概念：由一个识别一种抗原表位的B细胞克隆产生的同源抗体，称为～。 特点：结构和组成高度均一；抗原特异性及同种型一致；易于大量制备和纯化。 优点：纯度高，特异性强，效价高，少或无血清交叉反应，制备成本低。 制备原理：杂交瘤细胞和单克隆抗体技术。 应用：作为诊断试剂用于血清学检查；治疗自身免疫病和抑制移植排斥反应；治疗肿瘤的生物导弹。 针对单一表位，结构和组成高度均一，抗原特异性及同种型一致 针对不同抗原表位的抗体的混合物 组成 人体应用后可导致人鼠抗体反应 特异性不高、易发生交叉反应，不易大量制备 缺点 广泛用于疾病诊断、特异性抗原或蛋白的检测和鉴定、疾病的被动免疫治疗和生物导向药物制备 疾病的被动免疫治疗 应用 纯度高、特异性强、效价高、少或无血清交叉反应、制备成本低 来源广泛、制备容易 特点 多为鼠源性 动物免疫血清、恢复期病人血清或免疫接种人群 来源 单克隆抗体 多克隆抗体 多克隆抗体与单克隆抗体的比较 三、基因工程抗体 (genetic engineering antibody) 应用DNA重组技术和蛋白质工程技术，按人类意愿在基因水平上对Ig分子进行切割、拼接或修饰，重新组装的新型抗体。保留了天然抗体的特异性和主要生物学活性，去除无关结构，并可赋予新的生物学活性。 1. 人鼠嵌合抗体 2. 改型抗体或称CDR移植抗体 3. 双特异性抗体 4. Fab抗体 5. Fv抗体 6. 单价抗体 7. 单域抗体 8. 最小识别单位 抗体名称 抗体种类 靶向抗原 适应症 批准日期 OKT3 鼠单抗 CD3 移植排斥 1986 Panorex 鼠单抗 17-1A 大肠癌 1995