实验三琼脂糖凝胶电泳检测质粒DNA.pptVIP

分子生物学实验 课件作者：蒋华云 琼脂糖凝胶电泳检测质粒DNA 实验目的 学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术 检测上次实验课提取的质粒DNA 实验原理 电泳 带电物质在电场中的趋向运动称为电泳。凝胶电泳由于其操作简单、快速、灵敏等优点，已成为蛋白质、核酸研究的首选标准方法。 泳动率 泳动率是带电颗粒在一定的电场强度下，单位时间内在介质中的迁移距离。 影响泳动率的因素 样品的物理性状（分子大小、电荷多少、颗粒形状和空间构型） 支持物介质（琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶） 电场强度 缓冲液离子强度（最适离子强度一般在0.02～0.2之间） DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动的电荷效应和分子筛效应 DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动 在一定的电场强度下， DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即DNA分子本身的大小和构型 质粒DNA分子的3种构型 超螺旋的共价闭合环状质粒DNA（covalently closed circular DNA，简称CCCDNA） 开环质粒DNA，即共价闭合环状质粒DNA一条链断裂（open circular DNA，简称OCDNA） 线状质粒DNA，即共价闭合环状质粒DNA二条链断裂（linear DNA，简称L DNA） 实验仪器 分析天平 微波炉 移液器（10uL） 琼脂糖凝胶电泳系统（水平槽） 紫外线透射仪（或凝胶成像系