9第九讲PCR技术.pptVIP

聚合酶链式反应 （Polymerase Chain Reaction） PCR技术： 概念：通过模拟体内DNA复制的方式，在体外选择性地将DNA某个特殊区域扩增出来的技术。 广泛用于分子生物学和基因工程及其它与DNA鉴定相关的领域，如疾病检测、临床应用、商品检疫、法医鉴定、新药品的开发等。 PCR技术产生的历史背景 1971年，Khorana等人就提出了利用PCR在体外扩增DNA的概念； Saiki（1985）和Mullis（1986）两家研究室分别用改进的Kleppe法获得了大量染色体DNA单拷贝基因； 1988年，Chien从水生栖热菌（Thermus aquaticus）中分离出耐热DNA聚合酶，简称Taq DNA聚合酶； Mullis正式确定了体外扩增DNA技术，1987年获得专利，命名为Polymerase Chain Reaction (PCR)。 PCR反应的基本过程 PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成： ①变性(denaturation) 将模板DNA置于92～96℃处理，使dsDNA链解开成为ssDNA，以便它与引物结合. PCR反应的基本过程 ②退火(annealing) 模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的