AriaII操作手册-分选20160402讲义.docVIP

FACSAriaⅡ流式细胞仪 一、开机准备 （一）准备液路 将流式细胞仪的上盖打开； 开启计算机，等待所有程序载入。 开主机电源Mainpower（右图），从电脑桌面上双击打开FACSDiva软件，输入密码BDIS。打开激光开关laser power（根据实验需要进行选择）；开启实验所需激光器电源。 确认液流车中各种液体的液面水平（鞘液、废液、去离子水、漂白剂、乙醇），倒空废液或加满其他液体（下图）。 从软件的Cytometer菜单上选择Fluidic Startup(射流启动)，点击OK确认。 将出现如下窗口： 6．将液路和气路管道从酒精桶断开，连接到鞘液桶；完成后点Done； 7．将Closed-loop 喷嘴（闭环喷嘴）插入流动室；完成后点Done；会出现右侧窗口，提示液流开启进行中； 8．达到100%，移去Closed-loop喷嘴，完成后点Done； 9．按照实验要求，插入直径合适的喷嘴（喷嘴直径应该是分选颗粒直径的3-6倍）； 10．然后点OK，完成整个过程； 11．从菜单上选择Sort(分类)(sort setup,确认setup模式与喷嘴大小匹配。 （二）开液流 打开液流窗口的液流； 点击软件界面上（如下图）的按钮 打开分选液流窗口（如下图） 点击分选液流窗口的按钮(stream 的前面按钮)，开启液流 打开分选仓前的门，检查液流。液流应为一条细线落入废液槽正中(可通过调整红色标志的键)； （如果液流不稳，检查流动室中是否有气泡，将液流关闭，10秒钟后再开，排除气泡。） 关上分选仓前的门。 （三）设定液流断点 调整液流震幅（Ampl），使断滴位于窗口上方1/3处。（Ampl不要超过70，如果超过，检查流动室是否有气泡；确认鞘液压力和震动频率是否合适）； 确认卫星液滴与大液滴融合，应该在断滴的6滴之内融合（红色箭头数起，左图的左侧合格，右侧不合格），如果没有融合，重新安装喷嘴。 二、建立实验模板 1.在软件界面左侧Browser面板下，依次点击New Folder、Experiment、Specimen（均可重命名），单击Specimen左侧“+”符号，显示下方的Tube，点击左侧灰色指示箭头，使之变成绿色（当前指示）。 2. 在软件（）Cytometer面板上，点击Parameters选项卡，选择实验所需荧光通道（按Ctrl键可多选），并删除多余通道。选择荧光素名称、信号放大类型（log/lin）、信号脉冲类型（H/A/W）， 3. 在()右侧worksheet页面中，画出实验所需模板(斜箭头)：首先画出点图（双参数：FSC-A和SSC-A），根据阴性对照（未染色的细胞）圈出细胞群P1；其次画出点图（双参数：荧光名称），利用鼠标右键Show Populations选项，选择P1，建立图之间的联系(如下图)。 4.至此，一个简单的实验模板基本建成。现在可以将样本管放在上样台上，点击上样面板的load，此时Acquire Data自动被激活或手动点击采集控制面板上的Acqire data按钮，仪器开始获取样本数据。 5.根据实验情况调整Cytometer面板中各通道电压，使FSC/SSC中信号位于利于观察的位置（细胞群落在中央位置）。调整阈值（Threshold），去除碎片和噪音信号。调整上样速度（Flow Rate）（最大为10）。 6.在FSC/SSC中调整门的位置、大小和形状，使之圈住感兴趣细胞群。调节荧光通道的电压，使荧光信号位于合适的位置。 7.在鼠标右键中打开数据显示，观察实验的实时结果。 8.实验条件调整完毕后，在上样面板中设置Events To Record等参数，点击Record Data，开始保存数据。 （三）液流关机 预备关机 1．关激激光电源； 2．从上样架上移去上样管； 3．关闭液流(stream 的前面按钮)； 4．倒空废液桶； 5．加满酒精桶 关机 1．从菜单上选择Cytometerfluidics shutdown（关闭），会弹出下面窗口 2．从流动室上移去喷嘴；完成后点Done。 3．插入Closed-loop喷嘴，完成后点Done。 4．将鞘液桶的液流管和气管分别连接到酒精桶上，点Done。 5．按照提示，放上一管3ml清洗液，完成后点Done； 6．清洗完成后，按提示，点OK。 7．关闭流式细胞仪主机电源； 8．退出软件，关计算机。 清洗外部 用软布沾次氯酸钠和蒸馏水清洗分选仓、偏转板、上样架、分选收集架，进行消毒和避免形成盐结晶。 每日关机和日常维护 （一）日常关机 1．关闭液流 2．取下喷嘴，装上Closed