《体外受精和早期胚胎培养》详解.ppt

试管动物技术 概念 指通过人工操作使卵子和精子在体外条件下成熟和受精，并通过培养发育成早期胚胎后，再经移植产生后代的技术。 试管牛（两头小牛） 海福特肉用牛 蒙古黄牛 荷斯坦奶牛 意义（以良种牛的繁育为例） 采集良种母牛的卵母细胞 卵母细胞的体外培养 采集良种公牛精子 精子体外获能 体外受精 良种牛体外受精胚胎 胚胎移植 受体牛 良种犊牛 成熟期牛 屠宰加工厂 市场 采集卵巢中的卵母细胞 “试管牛”工厂化生产的技术流程图 （如黄牛） 意义 大量节省购买种畜的费用 加速了良种畜的繁殖速度 一、体外受精 （2）过程： （一）卵母细胞的采集和培养 （二）精子的采集和获能 （三）获能精子和卵细胞的受精 1、体外受精 （1）概念：采取雌性动物的卵细胞和雄性 动物的精子，使其在试管受精。 “试管动物” （一）卵母细胞的采集和培养 对不同动物,采取卵母细胞的方法不同 一是：活体采卵 二是：从已屠宰的母畜的卵巢中采卵 牛活体采卵示意图 （一）卵母细胞的采集和培养 对不同动物,采取卵母细胞的方法不同 一是：活体采卵 二是：从已屠宰的母畜的卵巢中采卵 牛活体采卵示意图 牛卵巢、卵母细胞和体外受精胚胎 牛卵母细胞 牛卵巢 体外受精胚胎 （一）卵母细胞的采集和培养 1.活体卵巢上采集 超排处理：用促性腺激素处理，使其排出更多 的卵子，然后可 A:从输卵管中冲取卵子。 B:借助超声波探测仪、内窥镜或腹腔镜等工具 直接采集从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞。 2.屠宰后卵巢上采集 无菌采集，放入30～39℃灭菌生理盐水，6h内带回实验室。 （1）卵巢表面卵泡卵母细胞的获得 采集方法3种。 ①抽吸法：用注射器配上12或18号针头，以PBS为抽卵 液，从卵巢表面抽吸卵泡。 ②切割法：用刀片反复切割卵泡，然后用PBS（添加5% 的犊牛血清）沿切口反复冲洗卵巢，回收。 ③剥离法：剥离突出于卵巢表面的卵泡，放在卵母细 胞培养液中，然后用针刺破眼科剪剪破卵 泡，回收。 （2）卵巢内卵母细胞的获得 用单面刀片或一组特制刀片对卵巢深层组织进行切割。可获得更多的COC。 （二）精子的采集和获能 1.精子采集方法 假阴道法 手握法 电刺激法 动物被处死后，从附睾尾收集精液（啮齿类的实验动物） 家畜采精用假台畜 2.精子的获能处理 培养法： 化学诱导法： 人工配制的获能液处理（啮齿类动物、 家兔、猪等动物精子） 一定浓度的肝素溶液或钙离子载体 A23187溶液处理（牛、羊等动物精子） （三）体外受精 在获能溶液或专用的受精溶液中完成受精过程 新鲜或解冻的精液 精子离心 处 理 精子获能处理 二、胚胎的早期培养 1.培养液： 两盐：无机盐、有机盐类 两素：维生素、激素 两酸：氨基酸、核苷酸 一清：动物血清 2.用于胚胎移植的胚胎一般在原肠胚以前。 不同胚胎移植的时间： 动物 胚胎移植时间 牛、羊 桑椹胚阶段或囊胚阶段 小鼠、家免 桑椹胚之前 8～16个细胞阶段 人试管胚胎