Optiprep分离人单个核细胞的操作流程.docVIP

人PBMCs最常用的分离方法是：把用生理盐水1：1稀释过的血液铺到密度为1.077的离心介质上，然后离心。介质主要为LymprepTM，NycoprepTM及OptiprepTM。 20世纪90年代，Ford和Rickwood用混合法分离了PBMCs，简化了如上操作流程。结合混合法利用OptiprepTM分离人PBMCs是目前最经济、最简便、分离效果最好的方法。 所需溶液 OptiprepTM（用前轻轻摇匀） Tricine-buffered saline TBS : 0.85% NaCl, 10 mM，Tricine-NaOH, pH 7.4。 操作流程：： 1.把全血与OptiprepTM按8：1体积比混合，并轻轻混匀，混匀要彻底。 注：如果20ml血液则需要2.5ml OptiprepTM。具体体积根据离心管的大小而定。 2.把0.5ml TBS铺到混合液的顶部，在20℃下1500g离心30min。 注：TBS可以用任何其它的缓冲液替代。 3.从凹液面下大约1cm下的细胞沉淀中收集PBMCS。整个过程见如下图片。 4.用两倍体积的生理盐水稀释收集到的细胞。然后在250－500g下离心5－10min来沉淀细胞。 相关图片： 原始文献： 参考文献 1. Ford, T. C. Rickwood, D. 1990 J. Immunol. Methods, 134, 23