第一篇第七单元专题三基因工程与克隆技术技术分析.ppt

考点一　基因工程　 (2014·全国课标Ⅱ，40)植物甲具有极强的耐旱性，其耐旱性与某个基因有关。若从该植物中获得该耐旱基因，并将其转移到耐旱性低的植物乙中，有可能提高后者的耐旱性。 回答下列问题： (1)理论上，基因组文库含有生物的________基因；而cDNA文库中含有生物的________基因。 (2)若要从植物甲中获得耐旱基因，可首先建立该植物的基因组文库，再从中________出所需的耐旱基因。 (3)将耐旱基因导入农杆菌，并通过农杆菌转化法将其导入植物________的体细胞中，经过一系列的过程得到再生植株。要确认该耐旱基因是否在再生植株中正确表达，应检测此再生植株中该基因的________，如果检测结果呈阳性，再在田间试验中检测植株的__________是否得到提高。 (4)假如用得到的二倍体转基因耐旱植株自交，子代中耐旱与不耐旱植株的数量比为3∶1时，则可推测该耐旱基因整合到了_________(填“同源染色体的一条上”或“同源染色体的两条上”)。 解析　(1)基因文库有两种：基因组文库和部分基因文库，基因组文库含有生物的全部基因；cDNA是以mRNA为模板逆转录得到的，而细胞中只有部分基因表达，所以cDNA文库含有生物的部分基因。(2)建立基因文库后要根据目的基因的特性从中筛选出目的基因。(3)目的基因与载体构建基因表达载体后，导入乙植物细胞(受体细胞)，需要进行表达产物(蛋白质)和生物个体水平(耐旱性)等的检测。(4)若是整合到同源染色体的两条上，则此耐旱二倍体植株为纯合子，自交后代不会发生性状分离，所以根据实验结果可推测：该耐旱基因整合到了同源染色体的一条上。 答案　(1)全部　部分 (2)筛选 (3)乙　表达产物 耐旱性 (4)同源染色体的一条上 高考必记的关键 1．基因工程常考的3种基本工具 限制性核酸内切酶、DNA连接酶和载体。 2．基因表达载体的组成 目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因＋复制原点等。 3．基因工程的四大操作程序 (1)目的基因的获取(三大方法) ①从基因文库中获取。 ②利用PCR技术扩增：其实质是在体外对目的基因进行大量复制。 ③用化学方法人工合成 (2)基因表达载体的构建。 (3)将目的基因导入受体细胞的“三大方法”： ①导入植物细胞——农杆菌转化法。 ②导入动物细胞——显微注射法。 ③导入微生物细胞——使用Ca2＋处理细胞。 (4)目的基因的检测与鉴定 1．(2014·江苏卷，23)(多选)下列关于基因工程技术的叙述，错误的是 (　　)。 A．切割质粒的限制性核酸内切酶均特异性地识别6个核苷酸序列 B．PCR反应中温度的周期性改变是为了DNA聚合酶催化不同的反应 C．载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选标记基因 D．抗虫基因即使成功地插入到植物细胞染色体上也未必能正常表达 解析　限制酶大多是特异性识别6个核苷酸序列，也有的识别4、5或8个核苷酸组成的序列，A错误；DNA聚合酶只是在延伸阶段发挥催化作用，B错误；质粒上一般带有的抗生素抗性基因可作为标记基因，供鉴定和选择，不是抗生素合成基因，C错误；目的基因导入受体细胞后不一定都能正常表达，D正确。 答案　ABC 2．(2014·广东卷，25)(多选)利用基因工程技术生产羧酸酯酶(CarE)制剂的流程如图所示，下列叙述正确的是 (　　)。 A．过程①需使用逆转录酶 B．过程②需使用解旋酶和PCR获取目的基因 C．过程③使用的感受态细胞可用NaCl溶液制备 D．过程④可利用DNA分子杂交鉴定目的基因是否已导入受体细胞 解析　过程①是逆转录过程，需要逆转录酶的催化，A正确；过程②表示利用PCR技术扩增目的基因，在PCR过程中不需要解旋酶催化，是通过控制温度达到解旋的目的，B错误；利用氯化钙处理大肠杆菌，使之成为感受态细胞，C错误；检测目的基因是否成功导入受体细胞可采用DNA分子杂交，或者是标记基因检测，D正确。 答案　AD 3．(2014·海南卷，31)下面是将某细菌的基因A导入大肠杆菌内，制备“工程菌”的示意图。 请据图回答： (1)获得A有两条途径：一是以A的mRNA为模板，在________酶的催化下，合成互补的单链DNA，然后在________作用下合成双链DNA，从而获得所需基因；二是根据目标蛋白质的________序列，推测出相应的mRNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测其DNA的________序列，再通过化学方法合成所需基因。 (2)利用PCR技术扩增DNA时，需要在反应体系中添加的有机物质有________、________、4种脱氧核苷酸三磷酸和耐热性的DNA聚合酶，扩增过程可