动物细胞培养和核移植技术---一轮复习详解.ppt

◆动物细胞培养 ◆动物细胞融合 ◆单克隆抗体制备 ◆动物体细胞核移植技术和克隆动物 2.2 动物细胞工程 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 资料：烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治疗该病人？ 取该患者的皮肤进行细胞培养,获得足量的细胞后再移植。 §2.2.1动物细胞培养和核移植技术 一、动物细胞培养 （一）概念： （二）原理： 动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 细胞增殖 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 转入培养瓶 40-50代细胞 无限传代 传代培养 单个细胞 剪碎、胰蛋白酶处理 细胞悬液 加培养液稀释 10代细胞 细胞株 细胞系 原代培养 （三）过程 分瓶培养 胰蛋白酶处理 动物组织消化后的初次培养 ①原代培养 特点：单层贴壁生长 要求： 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附 ②传代培养 原代培养的细胞处于接触抑制后， 用胰蛋白酶处理，使细胞从瓶壁上脱离下来，然后加入新的培养液，将细胞分离稀释，并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内，这个过程称传代培养。（分瓶培养的过程） 1、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？ 5、为什么要制成细胞悬液？ 细胞生命力旺盛，分化程度低，分裂能力强。 2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ （1）扩大细胞与培养液的接触面积，利与细胞吸收营养。 （2）解除接触抑制 3、为什么用胰蛋白酶处理而不用胃蛋白酶？ 动物细胞培养的最适PH值为7.2-7.4，胃蛋白酶PH为2，会失活。胰蛋白酶PH为7.2-8.4。 4、用胰蛋白酶处理不会把所培养的细胞消化掉吗？ 控制好时间！长时间处理当然会损伤细胞。 因为动物细胞培养用的是液体培养基 传代10代以内，遗传物质不改变，保持正常二倍体核型。 传代10-50代左右，增长缓慢以至于完全停止，部分细胞核型可能发生变化（遗传物质可能改变） 继续传代培养少部分细胞获得不死性，细胞突变，遗传物质已经改变，等同于癌细胞。 6、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样 最终培养成新个体？为什么？ 不能。动物体细胞不具有全能性。 动物细胞培养的结果：使细胞数目增多。 7、传代培养中，第10代细胞与第50代以后细胞的主要区别是什么？ ▲细胞系：传代50代以后不能再传下去，部分细胞遗传物质发生了改变，能连续传代，获得不死性，叫细胞系。 ▲细胞株：传代细胞一般能传到40-50代，遗传物质一般不会发生改变，叫细胞株。 强调一：细胞贴壁 ■细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 ■培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易于帖附。 ■当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 强调二：接触抑制 能否用胃蛋白酶代替胰蛋白酶？ 液体合成培养基（葡萄糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素等），通常还需加入血浆、血清等天然成分。 温度36.5±0.5度，pH7.2～7.4 1、无菌、无毒的环境 2、营养 3、温度和pH 4、气体环境 95%空气和5% CO2 O2是细胞代谢所必需的。 CO2维持培养液的pH。 （四）动物细胞培养的条件: 对培养液和所有培养用具无菌处理； 培养液中添加抗生素防止培养过程中污染； 定期更换培养液以清除代谢产物，防止对培养细胞造成危害。 （五）动物细胞培养技术的应用: 1.蛋白质生物制品的生产 病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体 2.应用于基因工程 主要用于作为受体细胞 3.检测有毒物质，判断某种物质的毒性 4.细胞的生理、药理、病理研究 筛选抗癌药物 植物组织培养和动物细胞培养的比较： 比较项目 植物组织培养 动物细胞培养 原理 培养基性质 培养基特有成分 培养结果 培养目的 取材 其他条件 细胞的全能性 细胞增殖 固体培养基 液体培养基 蔗糖 植物激素 葡萄糖、动物血清 植物体 细胞株、细胞系 快速繁殖、培育 无病毒植株 获得细胞或细胞分 泌蛋白 植物幼嫩部分或 花药 胚胎或幼龄动物的 器官或组织 无菌无毒，适宜 条件 无菌无毒，适宜 条件 二、动物体细胞核移植技术和克隆动物 1、定义： 动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中.使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体. 3、分类： 胚胎核移植、体细胞核移植。 2、原理： 动物细胞核具有全能性