2012高中生 5.3 血红蛋白的提取和分离课件 新人教版选修1.ppt

(1)在加样示意图中，正确的加样顺序是________________________________________________________________________。 (2)用吸管加样时，应注意正确操作，分别是①______________、②贴着管壁加样、③______________。 (3)等样品__________时，才加入缓冲液，待______________________接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每______________mL收集一管，连续收集。 【尝试解答】　(1)④→①→②→③ (2)不要破坏凝胶面　使吸管管口沿管壁环绕移动 (3)完全进入凝胶层　红色的蛋白质　5 【解析】　加样品时应严格按要求进行操作，吸管应贴着管壁，管口沿着管壁环绕移动，还应注意不要破坏凝胶面。等样品完全进入到凝胶层时，才加入缓冲液进行洗脱。 【探规寻律】　对分离效果的判断 (1)若血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整地随洗脱液缓慢流出，则装填成功，分离操作正确。 (2)若血红蛋白的红色区带歪曲、散乱、变宽，则说明分离效果不好，装填不成功。 【互动探究】　(1)凝胶色谱柱的装填应注意哪些事项？ (2)血红蛋白溶液是如何分离的？ 【提示】　(1)①装填前为了加速膨胀，可以加入洗脱液的湿凝胶，用沸水浴加热，优点是：节约时间，除去凝胶中可能带有的微生物，排除胶粒内的空气。 ②装填时不能有气泡，气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。 ③装填后不能发生洗脱液流干露出凝胶颗粒的现象。 (2)蛋白质的分离是根据离心原理进行的。当含有细小颗粒的悬浮液静置不动时，由于重力场的作用使得悬浮的颗粒逐渐下沉。粒子越重，下沉越快，反之密度比液体小的粒子就会上浮。微粒在重力场下移动的速度与微粒的大小、形态和密度有关，并且又与重力场的强度及液体的黏度有关。像红细胞大小的颗粒，直径为数微米，就可以在通常重力作用下观察到它们的沉降过程。 * 课题3　 血红蛋白的提取和分离 课标领航 1．概述凝胶色谱法、电泳法等分离大分子的基本原理。 2．能根据凝胶色谱过程中的现象和结果，评价实验操作的过程是否规范，分析实验结果。 3．尝试对血液中血红蛋白的提取和分离，体验从复杂的体系中提取生物大分子的基本过程和方法。 【重点】　凝胶色谱法、电泳法基本原理。 【难点】　实验操作的过程及分析。 情境导引 为年老多病的人注射丙种 球蛋白，可以在一定程度上增强 其身体的抵抗力。在动物体内， 丙种球蛋白和许多蛋白质混合 在一起。要获得纯净的丙种球蛋 白制品，就必须进行提取和分离。 电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现了样品中各种分子的分离。 基础自主梳理 一、凝胶色谱法 1．概念：也称作分配色谱法，是根据__________质量的大小分离蛋白质的有效方法。 2．原理 (1)由微小的多孔球体构成的凝胶，内部有许多贯穿的通道。 相对分子 (2)由相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量_____的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢，而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在________移动，路程较短，移动速度较快，从而使相对分子质量不同的蛋白质分子得以分离。 二、缓冲溶液 1．作用：在一定范围内，抵制外界的________对溶液pH的影响，维持pH基本不变。 较小 凝胶外部 酸和碱 2．配制：由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成，通过调节缓冲剂的________就可以得到不同pH范围内使用的缓冲液。 三、电泳 1．概念：指________在电场的作用下发生迁移的过程。 2．原理：在一定的pH下，多肽、核酸等生物大分子的可解离基团会带上正电或负电，在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷_____的电极移动。 使用比例 带电粒子 相反 3．作用：电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异及分子本身的大小、____的不同，使带电分子产生不同的____________，从而实现样品中各种分子的分离。 4．方法：常用的电泳方法有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。 四、实验操作 1．样品处理：通过_______________、____________________、分离血红蛋白溶液等操作收集血红蛋白溶液。 (1)红细胞的洗涤：目的是去除杂蛋白。分离时采取低速短时间离心，直至上清液中没有黄色，表明红细胞已洗涤干净。 形状 迁移速度 红细胞的洗涤 血红蛋白的释放 思考感悟? 1．洗涤红细胞时为什么不能用蒸馏水代替生理盐水？ 【提示】　生理盐水能保持红细胞的渗透压稳定而不至于破裂。在未洗净血浆中的杂质蛋白前，红细胞如果提前破裂，就可能使血红蛋