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干细胞揭秘 干细胞定义 干细胞是指功能上具自我更新(self-renewal)能力，同时具有自我分化（differentiation)能力的一类细胞。 干细胞分类与特点 不同的干细胞具有不同的分化潜能。 分化功能：干细胞可分为单能干细胞、多能干细胞与全能干细胞。全能干细胞从理论上可以分化成所有组织与器官。 来源：干细胞包括成体干细胞和胚胎干细胞。 胚胎干细胞培养方法 （1）有饲养层培养法 主要应用小鼠胚胎原代成纤维细胞（PMEF）和SIM小鼠成纤维细硫代鸟嘌和耐乌苯苷亚系STO细胞作为饲养层细胞。 PMEF和SIM都能分泌促进胚胎干细胞增生和抑制胚胎干细胞自主分化的因子——白血病抑制因子（LIF）。白血病抑制因子（Leukemia inhibitory factor，LIF）一种天然细胞因子，因可以抑制白血病细胞系M1的生长和分化而得名 胚胎干细胞培养方法 （2）无饲养层培养法 是利用各种能分泌抑制分化因子的细胞制备条件培养基，或者在基础培养基加入重组的LIF等细胞因子制备成条件培养基。保证胚胎干细胞增殖的同时维持未分化的二倍 体状态 胚胎干细胞培养流程 胚胎内细胞团分离 培养胚胎干细胞培养 流程： 细胞团获得 原代培养 传代培养（建系） 鉴定（干细胞、分化 潜能） 成体干细胞培养—以脂肪干细胞为例 脂肪组织来源干细胞(adipose tissue—derived stem cells，ADSCs)是位于脂肪基质内的一种细 胞，具有多向分化潜能。可以定向分化成多种细 胞类型，诸如脂肪细胞、平滑肌细胞、软骨细胞、 成骨、神经、血管、肝脏、血管内皮细胞等。 细胞获取常用胶原酶消化、含血清DMEM 液贴壁 生长的方法（前面介绍的动物细胞培养技术） 成体干细胞分离 成体干细胞具有特征细胞表面标志物（受体蛋白）：例如：CD133、CD34--神经干细胞；CD71、CD90--间质干细胞；等。 通过设计针对特殊受体的标记物，处理细胞，荧光检测，有荧光的说明是干 细胞。 胚胎干细胞和成体干细胞的研究比较 1.胚胎干细胞优点 无限的分化潜能 2.胚胎干细胞问题 （1）来源限制：人类胚胎干细胞研究存在细胞 来源限制问题。 （2）体外培养困难：由于胚胎干细胞在体外培 养会自发分化，而且机制还不非常清楚，控制胚 胎干细胞分化的抑制的技术有待完善，例如饲养 层细胞与条件培养基还不成 胚胎干细胞和成体干细胞的研究比较 （1）由于成体干细胞在组织中含量极少，又缺乏特异性 检测标志，因此很难从组织中分离纯化出来。 （2）成体干细胞的可塑性机制还不清楚。例如：脂肪组 织来源的干细胞不能排除随血液进入脂肪组织的造血干 细胞或其他类型的干细胞。要确定一种成体干细胞的确 切的组织来源还需要进行大量深入的研究。 （3）还有待建立有效的使成体干细胞在体外增殖而又能 维持未分化状态的技术。 （4）成体干细胞体外长期传代后会发生表型的改变，且 成体干细胞也参与肿瘤的形成。因此，有关成体干细胞 的生物学安全性也越来越受到人们的关注。 胚胎干细胞和成体干细胞的研究比较 （3）安全性：胚胎干细胞和多能成体干细胞的 自发分化方向是多向的，移植到体内的干细胞的 分化方向会与预期不同。干细胞移植后的成瘤性 风险也比较大。异体移植仍能引起免疫排斥反应。 （4）伦理道德问题：获取人的胚胎干细胞、建 立胚胎干细胞系必须要破坏胚囊，体外培养的胚 囊是否具有生命还存在着争议，所以人类胚胎干 细胞研究面临伦理道德问题。 应用 干细胞生物学被1999年美国《科学》推举为二十一世纪最重要的十项科学领域之首。 1.组织或器官修复 《科学日报》2010年5月 27日报道，美国加州大学 欧文分校（UC Irvine） 的科学家们用人类胚胎干 细胞培育出一种早期阶段 的视网膜，为开发可移植 性视网膜来治疗人类视网 膜病变迈出了第一步 （Journal of Neuroscience Methods。） 2.疾病治疗 甲型糖尿病称之为胰岛素依赖性糖尿病，病人胰脏不能正常地分泌胰岛素。必须通过注射胰岛素来控制血糖含量，通常情况下患者一天最少需要注射四次。 2007年4月11日：英国《泰晤士报》在头版报道了用干细胞技术治疗糖尿病取得了重大突破，摆脱对胰岛素的依 3.药物的效能和毒性检验 药物的效能和毒性检测目前对于药物或是化学物品制畸性的评估, 常常是用大量的怀孕动物来研究。由于干细胞可以模拟胚胎发育过程中细胞与组织间复杂的相互作用, 因此, 它不但可以成为毒理学研究的有效工具, 其相关技术还可能为现有的药物筛选体系带来革命性的进步。 4.基