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第三节 吸光光度法的仪器 一、吸光光度计的基本部件 一般由五部分组成： （一）光源 作用：提供一定波长范围的复合光。 要求：能提供具有足够发射强度、稳定且波长连续的复合光，同时发射光的强度还应不随波长的变化而明显改变。 常用的光源为6?12伏低压钨丝灯，发射的复合光的波长约在400?2500nm。当在近紫外光区测定时应使用氢灯或氘灯作光源，发射的波长为185?375nm。电源由恒温器供给；为了保持光源强度的稳定，以获得准确的测定结果，电压必须稳定。 （二）单色器（分光系统） 作用：把复合光中分出所需要的单色光。 （三）吸收池（比色皿） 作用：盛装参比溶液、试液溶液。 比色皿是用透明无色的光学玻璃制作的。大多数比色皿为长方形，也有圆柱形的。一般厚度为0.5、1、2和3厘米。 (1) 在可见光区测定时，使用玻璃吸收池； (2) 在紫外光区测定时，使用石英吸收池。 （四）检测系统(又叫光电转化器) 作用：检测被吸收的光。 在光度计中，常用的是硒光电池。晒光电池和眼睛相似，对于各种不同波长的光线，灵敏度是不同的，对光的响应范围为300~800nm，对于波长为500~600nm的光线最灵敏，而对紫外线，红外线则不能应用。 光电管和光电倍增管用于较精密的分光光度计中。具有灵敏度高、光敏范围广及不易疲劳等特点。 （五）信号显示系统 作用：记录、显示测量结果。 早期使用的是检流计、微安表、电位计、数字电压表、自动记录仪等。 现代的分光光度计广泛采用数字显示器、函数记录仪、示波器及数据处理台等。 二、吸光度的测量原理 分光光度计实际上测得的是光电流或电压，通过转换器将测得的电流或电压转换为对应的吸光度A。测定时，只要将待测物质推入光路，即可直接读出吸光度值。 测定步骤： 1. 调节检测器零点，即仪器的机械零点。 2. 应用不含待测组分的参比溶液调节吸光零点。 3. 测定待测组分的吸光度。 三、分光光度计的类型 1. 可见分光光度计 2. 紫外-可见分光光度计 3. 红外分光光度计 (一)单光束分光光度计 分为：721、722、751型。 751型分光光度计是一种波长范围较宽(200~1000nm)、精密度较高的分光光度计。由光源(钨丝灯或氢灯)发出的光线由反射镜反射，使光线经狭缝的下半部，经准光镜进入单色器棱镜色散底，由准光镜将光聚焦于狭缝上半部而射出，经液槽照射于光电管上。由此可见，仪器用同一狭缝作入光和出光狭缝，它们始终具有相同的宽度。 (1) 波长200-320nm范围用氢灯作光源，波长320-1000nm范围用钨丝灯作光源。 (2) 棱镜和透镜均由石英材料作成，反光镜和准光镜表面镀铝。所以全部系统保证紫外光谱通过。 (3) 波长200-625nm用蓝敏光电管(GD-5)测量透射光强度，波长625-1000nm用红放光电管(GD-6)测量透射光强度。 (3) 吸光度和透光度通过显示屏读出。 (二)双光束分光光度计 (三)双波长分光光度计 * * 光源→单色器→吸收池→检测系统→信号显示系统 (1) 棱镜是根据不同波长光的折射率不同来分光的。 (2) 光栅是根据光的衍射和干涉原理来分光的。 1.玻璃应在波长360~3200nm范围使用，主要用于可见分光光度计。 2.石英可用于波长范围一般为200~4000nm ，适用于紫外-可见分光光度计。 *