实验二细菌基本形态及特殊结构观察解决方案.ppt

实验二 细菌基本形态和特殊结构观察 一 目的要求 1 了解普通光学显微镜原理及构造。 2 学习并掌握普通光学显微镜油镜的正确使用方法。★ 3 用油镜观察细菌基本形态。 4 了解负染色原理、细菌芽孢染色基本原理，油镜观察细 菌的荚膜、芽孢形态。 5 细菌运动性观察。 二 基本原理 １　普通光学显微镜的结构 ２　普通光学显微镜的光学成象原理 3 荚膜染色 4 芽孢染色 １　普通光学显微镜的结构 （1 )　机械系统　 　　包括镜座、镜臂、载物台、物镜转换器、镜筒及调节器等 （2 )　光学系统 　 包括反光镜、聚光器、物镜、目镜等。 ２　普通光学显微镜的光学成象原理 （1）显微镜的放大倍数 放大倍数：目镜的放大倍数与物镜的放大倍数之乘积 。 目镜 ： 物镜 低倍镜：10X 高被镜：40X 油镜：100X 10 X 100X 目镜 物镜 ⑵　显微镜的分辨率 油镜比低倍镜、高倍镜观察物体更清晰。 原因： ◆ 油镜分辨率高于低倍镜、高倍镜 ◆ 油镜汇聚光线的能力大于低倍镜、高倍镜 ◆ 分辨率是指显微镜能够分辨的最小距离即鉴别限度（R） R=λ∕（2NA） (λ为入射光波波长；　　 NA为显微镜数值孔径) NA= η.sinθ η为标本、物镜之间介质的折射率。 θ为光轴上物点发出的光线与物镜有效直径两端最大夹角角度的 一半。 η低倍镜= η高倍镜=η空气=1.0 ， η油镜η香柏油=1.52 θ低倍镜 θ高倍镜 θ油镜 ， sinθ低倍镜 sinθ高倍镜 sinθ油镜 NA低倍镜 NA高倍镜 NA油镜 所以，油镜的分辨力比高倍镜、低倍镜高。 汇聚光线的能力油镜高于低倍镜、高倍镜。 3 荚膜染色 主要成分多为糖类，无色透明且不易着色常用负染色观察。负染色是将细菌细胞和背景着色，从而把无色透明、不着色的荚膜结构衬托显现出来。 菌体 荚膜 菌胶团： 多个菌体的荚膜融合为一个团状物，内有多个菌体。 菌胶团 4 芽孢染色 细菌芽孢壁厚而致密，透性低，难于染色，但一旦被染色又难于脱色。因此先用强着色力的染料（孔雀绿）处理，并同时加热，使菌体以及芽孢均着色，后使菌体脱色，而芽孢保留原色，经复染（蕃红），菌体与芽孢分别以不同颜色显现。 芽孢 菌体 菌体 芽孢 对有芽孢的菌体进行简单染色（只用一种染料染色）。 菌体和芽孢着色情况如何？ 菌体 芽孢 三 实验材料 ▲细菌基本形态标本片：大肠杆菌片 枯草杆菌片 八叠球菌片 ▲ 细菌特殊形态标本片：枯草芽孢杆菌芽孢片 ▲ 示范片观察：荚膜片观察 悬滴法观察活细菌的运动 四 实验内容及步骤 1 细菌基本形态观察 2 细菌特殊结构观察 3 悬滴法观察活细菌运动 1 细菌基本形态观察 学习油镜的正确使用方法。 用油镜观察—— 大肠杆菌 枯草杆菌 八叠球菌 2 细菌特殊结构观察 学习油镜的正确使用方法。 用油镜观察细菌特殊结构—— 枯草芽孢杆菌芽孢（油镜） 钾细菌荚膜（高倍镜）（示范） 荚膜 菌体 菌胶团 菌体 芽孢 3 悬滴法观察活细菌运动 悬滴片制好后，用低倍镜调焦，换高倍镜观察。 注意：视野中暗光观察。运动的菌体发亮。 ▲观察前准备 ：显微镜的准备和调试视野明亮 ▲低倍镜观察 ▲高倍镜观察（此步可以省略） ▲油镜观察：加香柏油，油镜头浸入香柏油中后调焦 ▲显微镜油镜头的清洗和归位（二甲苯清洗） 油镜使用主要步骤 注意 ！！！ —— 显微镜调焦方法 五 实验报告 绘 大肠杆菌 枯草杆菌 八叠球菌形态示意图 绘枯草芽孢杆菌芽孢形态示意图 菌 名：大肠杆菌 放大倍数：16×100 X