常用基本实验知识.docVIP

一、常用基本实验知识 1、离心转速和相对离心力的换算 在众多的参考文献中都是以离心力（ g force ）作为实验参数的说明而非转速（ rpm ）。 ）r ：旋转中心至转头内离心管某一部分的半径（以 mm 为单位） ：转头每分钟旋转的转数 RCF(g)=1.12 ×10-5×r×（RPM）2 2、酶活力及其测定 酶的活性（酶活力）： 又称为酶活性，一般把酶催化一定化学反应的能力称为酶活力。通常以在一定条件下酶所催化的化学反应速度来表示。因此酶活力可用单位时间内单位体积中底物的减少量或产物的增加量表示，单位为浓度单位时间等。 　　酶是蛋白质，种类多，结构复杂多样，一般对酶的测定，不是直接测定其酶蛋白的浓度，而是测定其催化化学反应的能力，这是基于在最优化条件下，当底物足够（过量），在酶促反应的初始阶段，酶促反应的速度（初速度）与酶的浓度成正比（即 V=K ［ E ］），故酶活力测定的是化学反应速度，一定条件下可代表酶活性分子浓度 测定酶活力常有以下几种方法： l ） 在一个反应体系中，加入一定量的酶液，开始计时反应，经一定时间反应后，终止反应，测定在这一时间间隔内发生的化学反应量（终止时与起始时的浓度差），这时测得的是初速度。 2 ）在一定条件下，加入一定量底物（规定），再加入合适量的酶液，测定完成该反应（底物反应完）所需的时间，（非初速度，为一平均速度）。 酶活力单位： 是衡量酶活力大小的计量单位 酶活力单位：规定条件（最适条件）下一定时间内催化完成一定化学反应量所需的酶量。 根据不同情况有几种酶活力单位或又称酶单位。 2.2.1国际单位： 1 、国际单位 U （active unit）：在最佳条件或某一固定条件下每分钟催化生成 1 μ mol 产物所需要的酶量为一个酶活力单位 。 2 、 “ Katal ” 单位：指在一定条件下 1 秒钟内转化 1mol 底物所需的酶量。 1 Kat=1mol/s Kat 和 U 的换算关系： 1 Kat=6 × 10 7 U ， 1U=16067 n Kat 比活力（比活性）每单位（一般是 mg ）蛋白质中的酶活力单位数（酶单位 /mg 蛋白） 。 　　实际应用中也用每单位制剂中含有的酶活力数表示（如：酶单位 /mL （液体制剂），酶单位 /g （固体制剂）），对同一种酶来讲，比活力愈高则表示酶的纯度越高（含杂质越少），所以比活力是评价酶纯度高低的一个指标。 在评价纯化酶的纯化操作中，还有一个概念就是回收率。 回收率 = 某纯化操作后的总活力 / 某纯化操作前的总活力 ［总活力 = 比活力×总体积（总重量）］ （单位）式中 在单次测量中是算术平均值，在多次测量中是由函数关系计算出的间接测量值； 为多次测量的误差。 2）： （i=1,2,…,n） 需要注意的是：测量值的标准偏差并不表示测量值的误差的实际大小，因为测量值的偶然误差是随机的，所以测量值的标准偏差只表示，任一测量值的误差落在区域（+ 、- ）内的概率为 68.3%,这就是标准偏差的含义。 3）LSD多重比较方法最小显著差数测验法 F 测验的目的是判断 K 个处理平均数间的差异是否显著在一个正态总体中，随机抽取两个独立样本，分别求得其均方 和 ，则将 和 的比值定义为 F ： F = 此 F 值具有的 自由度 和 的自由度 ，如果我们在给定的 和 下进行一系列连续独立的随机抽样，就会得到一系列 F 值，这所有可能的 F 值所构成的分布叫 F 分布。F 分布下一定区间的概率可从教材所附的 F 表查出， F 表系各种 和 下右尾概率α =0.05 和α =0.01 时的临界 F 值（一尾概率表）。如 =4 ， =8 时， =3.84, =7.01, 即表示如以 =4 （ =5 ） , =8( =9) 在一正态总体中进行连续抽样，则所得 F 值大于 3.84 的仅有 5% ，而大于 7.01 的仅有 1% 。所以附表的数值设计是专供测验 的总体方差 是否显著大于 的总体方差 而用的（ : ≤ 对 : ）。在作 F 测验时应以取大值的均方（ 也叫大均方）作分子，取小值的均方（ 即小均方）作分母而计算 F 值。若所得 F ≥ 或≥ ，则该 F 值即为在α =0.05 或α =0.01 水平上显著，应否定 ，接受 ；若所得 F , 则接受 。 ??? 在方差分析体系中， F 测验是用于测验某项变异因素的效应（如处理效应）或方差是否真实存在。所以在计算 F 值时，总是将要测验的那一项变异因素的均方（如 ）作分子，而以另一项变异因素的均方（如 ）作分母。如果作分子的均方小于作分母的均方，则 F1 ，此时不必查表即可确定应接受 。因此如果样本平均数间的变异并不显著大于样本内（随机误差）的变异，则 F =