SDS-PAGE测定蛋白质分子质量.ppt

电泳技术理论 一、电泳定义：带电荷的颗粒在电场的作用下向其电性相反的的方向移动。 二、电泳分类： 按电荷量分离 按分子量分离 按等电点分离 三、SDS应用： 1、测分子量 2、分离鉴定 3、双向电泳第二向 SDS测定蛋白质分子质量 一、原理： SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白分子量,是根据大多数蛋白都能与阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)按重量比结合成复合物,使蛋白分子所带的负电荷远远超过天然蛋白分子的负电荷，消除了不同蛋白分子的电荷效应,使蛋白分子相对迁移率(Rf)的大小完全取决于分子量的高低，因此可从已知分子量的标准蛋白的对数和相对迁移率所作的标准曲线中求出样品的分子量。 相对迁移率和分子量计算 LogM=a-bRf? 相对迁移率(Rf)＝蛋白移动的距离/染料移动的前沿距离 以Rf为横坐标,已知分子量标准蛋白的对数为纵坐标,在半对数坐标纸上绘图,由标准曲线中查出样品分子量。 SDS实验流程（SDS) 电泳技术流程： 制备载体（制胶）→加样→电泳→剥胶→染色→脱色→测定结果(凝胶成像） 常用载体制备： 丙烯酰胺+甲叉双丙烯酰胺→（催化剂） →聚丙烯酰胺凝胶 SDS的作用：球形蛋白+ SDS →长棒形蛋白（线状） 样品处理液（巯基乙醇）-S-S- →-HS,SH- 聚丙烯酰胺凝胶作用：分子筛 二、实验方法 实验方法： 样品处理：100uL样品+1