基因工程复习题2.docVIP

一、名词解释：（10～20%） 　　基因工程工具酶　限制性内切酶　　限制性内切酶的Star活性 PCR引物 PCR扩增平台期　　DNA芯片　基因组文库　cDNA文库　　　限制与修饰系统　 原位杂交：将细胞或组织的核酸固定保持在原来的位置上，然后用探针与之杂交的一种核酸分子杂交技术，该方法可较好地反映目的基因在细胞或组织中的分布和表达变化。 粘性末端：双链DNA被限制性内切酶切割后，形成的两条链错开几个碱基，而不是平齐的末端。 Northern印迹杂交：将RNA进行变性电泳后，再转移到固相支持物上与探针杂交的一种核酸分子杂交技术，可用于检测目的基因的转录水平。 转位：一个或一组基因片段从基因组的一个位置转移到另一个位置的现象。 基因工程：在体外，用酶学方法将各种来源的DNA与载体DNA连接成为重组DNA，继而通过转化和筛选得到含有目的基因的宿主细胞，最后进行扩增得到大量相同重组DNA分子的过程称为基因工程，又称基因克隆、DNA克隆和重组DNA等。 目的基因：基因工程中，那些被感兴趣的、被选作研究对象的基因就叫作目的基因。 连接器：人工合成的一段含有某些酶切位点寡核苷酸片段，连接到目的基因的两端，便于基因重组中的切割和连接。 转化：受体细胞被导入外源DNA并使其生物性状发生改变的过程。 停滞效应：PCR中后期，随着目的DNA扩展产物逐渐积累，酶的催化反应趋于饱和，DNA扩增产物的增加减慢，进入相对稳定状态，即为停滞效应，又称平台期。 逆转录PCR：以mRNA为原始模板进行的PCR反应。 PCR: 即聚合酶链式反应。在模板，引物，4种dNTP和耐热DNA聚合酶存在的条件下，特异性地扩增位于两段已知序列之间的DNA区段地酶促合成反应。 α-互补（α-complementation）：指在M13噬菌体DNA或PUC质粒序列中，插入了lac启动子-操纵子基因序列以及编码β-半乳糖苷酶N-端145个氨基酸的核苷酸序列（又称α-肽），该序列不能产生有活性的β-半乳糖苷酶。 感染（infection）特指以λ噬菌体、粘粒和真核细胞病毒为载体的重组DNA分子，在体外经过包装成具有感染能力的病毒或噬菌体颗粒，才能感染适当的细胞，并在细胞内扩增。其中，由噬菌体和细胞病毒介导的遗传信息的转移过程又称为转导（transduction）。 47、转染（transformation）指真核细胞主动摄取或被动导入外源DNA片段而获得新的表型的过程。 二、填空题（20%） 1、DNA片段重组连接的方法主要有 平端连接、粘端连接、同聚尾连接、加接头连接 。 2、感受态细胞是指 具有摄取外源DNA分子能力的细胞。 3、λ噬菌体蛋白对重组DNA体外包装时，包装长度为野生型λDNA的75~105%。 5、PCR反应体系含有耐热的TaqDNA聚合酶，化学合成的寡核苷酸引物，四种dNTP，合适的缓冲液体系。 6、核酸探针包括： cDNA探针；基因组DNA探针；寡核苷酸探针和RNA探针。 7、部分酶切可采取的措施有：(1)____________(2)___________ (3)___________等。(1)减少酶量；(2)缩短反应时间；(3)增大反应体积 8、DNA聚合酶I的Klenow大片段是用_____________切割DNA聚合酶I得到的分子量为76kDa的大片段，具有两种酶活性： (1)____________； (2)________________的活性。 枯草杆菌蛋白酶；(1)5-3合成酶的活性；(2)3-5外切核酸酶 9、为了防止DNA的自身环化，可用_____________去双链DNA__________________。碱性磷酸酶；5’端的磷酸基团 10、基因工程中有3种主要类型的载体： _______________、_____________、______________。质粒DNA；病毒DNA；质粒和病毒DNA杂合体 11、pBR322是一种改造型的质粒，它的复制子来源于 ，它的四环素抗性基因来自于 ，它的氨苄青霉素抗性基因来自于 。pMBl； pSCl01；pSF2124(R质粒) 13、DNA重组连接的方法大致分为四种：(1)_________________　(2)_______________ (3) _____________(4)_ ______________________。(1)黏性末端连接； (2)平末端连接； (3)同聚物接尾连接； (4)接头连接法 14、差示杂交(differential hybridization)技术需要__________________________。两种不同的细胞群体能够表达不同的基因，即在一个群体中