脂肪乳化酶.docVIP

学生编号：　　 课程论文 2011-2012学年第2学期 题 目：　脂肪酶的生产工艺和其在面粉改良中的应用　　　　　　　　　　　　 课程名称： 　 　　　酶工程　　　　 课程序号： 　　 　　 0706　　　 　 学　　院： 　 　 　生化学院　　　 专　　业： 　 生物技术　 姓　　名： 　　　 　汪骏　　　　　 学　　号： 完成时间： 　2012年 5 月　20 日 脂肪酶的生产工艺和其在面粉改良中的应用 生技091班汪骏 摘要：课程论文主要涉及脂肪酶的生产工艺，分离纯化，应用方面综述脂肪酶在面粉改良中的应用，即乳化作用在面粉改良所起的作用。 关键词：脂肪酶 发酵 分离纯化 小麦粉 1 脂肪酶的简介 1.1脂肪酶的定义[1] 脂肪酶，又称甘油酯水解酶，是指分解或合成高级脂肪酸和丙三醇行成的甘油三酸脂脂键的酶。脂肪酶是一类特殊的脂键水解酶，只作用于异相系统，即只在油水界面上作用，而且只有当底物以微粒、小聚合分散状态或呈乳化颗粒时，脂肪酶对底物水解才有显著的催化作用。 1.2脂肪酶的结构特点[2] 脂肪酶分子由亲水、疏水两部分组成，活性中心靠近分子疏水端。脂肪酶结构有2个特点：（1）脂肪酶都包括同源区段：His—X—Y—Gly—Z，Ser—W—Gly或 Y—Gly—His—Ser—W—Gly（x、Y、w、Z是可变的氨基酸残基）；（2）活性中心是丝氨酸残基。 1.3重要的脂肪酶 ATGL脂肪甘油三酯脂肪酶，HSL激素敏感性脂肪酶，和单脂脂肪酶，其中ATGL只水解TG，而HSL可以水解TG和DG,而MGL只水解甘油单酯。是重要的工业酶制剂品种之一，可以催化解脂、酯交换、酯合成等反应，广泛应用于油脂加工、食品、医药、日化等工业。不同来源的脂肪酶具有不同的催化特点和催化活力。其中用于有机相合成的具有转酯化或酯化功能的脂肪酶的规模化生产对于酶催化合成精细化学品和手性化合物有重要意义。 超滤浓缩 添加填充剂 干燥 造粒包埋 3 脂肪酶的分离纯化[5] 3.1 双水相萃取分离法 当两种水溶性聚合物溶液混合时，就会产生相分离现象。用一种聚合物和盐溶液可以形成双水相萃取体系，可替代两相均为聚合物时形成的双水相体系。生物大分子在双水相中受到氢键、疏水作用和离子键等各种作用力而选择性分配。且双水相体系中聚合物的多元醇结构对分子具有保护作用，当含水量高达70%以上时，具有上下相密度差小,分相时间短，系统可直线放大40000倍等优点[6]。 3.2 膜分离法 超滤膜错流过滤技术应用于脂肪酶的分离,可使失去生物活性的细胞从培养基中分离,从而使含有脂肪酶的上清液得以澄清,采用具有毛细作用的超滤膜用于脂肪酶的分离纯化,已有广泛研究[7]。目前应用的两种具有毛细作用的超滤膜有两种:聚丙烯腈(PAN)和聚砜(PS),研究发现,透过这两种膜的脂肪酶流量显著减少,这种影响在亲水的PAN膜上表现尤其明显,此类膜可纯化15倍,而在PS膜上并不十分明显,仅仅可纯化3倍,因此, PS膜更适宜于脂肪酶的浓缩,而PAN膜则适宜于酶的分馏。在PAN膜上有15%的蛋白质被吸收,这些蛋白质具有30%的活性,而在PS膜有30%的蛋白质被吸收,这些蛋白质具有40%的活性,经超滤处理后蛋白质损失15%~30%,酶活损失30% ~40%。 3.3 硫酸铵-丙酮协同沉淀法 李燕妮等人采用硫酸铵-丙酮协同沉淀法对南极假丝酵母生产的脂肪酶进行了纯化研究,并通过正交试验确定了优化工艺。经纯化后，酶活回收率为54%，纯化倍数为2.72。 3.4 免疫纯化技术 免疫纯化是一种亲核力极强且具有极高选择性的高效纯化方法。一步法可将酶纯化1 000 ~10 000倍，这种方法克服了其它方法所无法解决的问题，因为合适而高效的抗体可将相似的抗原成分完全分开。但免疫纯化法是一种价格相对昂贵的亲和纯化方法，尤其是在纯化过程中所用到McAb时。但当McAb大规模应用于酶的纯化时，可实现规模化生产。很多免疫亲核纯化过程都是由McAb与具有亲核纯化能力的多克隆抗体完成,此法的采用主要取决于McAb对靶蛋白的有效性以及原料的物系组成，如原料物类型以及纯度等。 3.5 界面亲和层析技术 脂肪酶疏水腔具有“开”和“关”2种构象。Bastida等[8]研究发现：在极低离子强度条件下，商业皱褶假丝酵母脂肪酶制剂(CRL)以一种完全不同于常规疏水吸附的方式被疏水载体吸附。此时，其活性中心周围的疏水腔处于“开”构象，具有亲水-疏水界面特性。CRL因此被固定在疏水载体上，由于活性中心周围疏水