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液相色谱 Authoring Division Name File Name Security Notice (if required) I. 常见问题 基线噪音 基线漂移 鬼 峰 峰 型 峰 型 峰 型 峰 型 峰 型 宽 峰 柱外体积 HPLC使用的接头 HPLC中使用的柱接头 柱外体积效应的影响 I. 不进样时柱压连续升高 - 泵密封垫 - 流动相有颗粒 - 流动相溶解性 - 流动相的不稳定性 (聚合) - 形成柱死体积 (与使用条件有关) II. 进样时压力升高 - 样品有颗粒 - 样品在流动相中不溶 - 样品组分与固定相不兼容 I. 所有峰都向低保留值方向漂移（酸、碱、中性化合物） - 键合相流失 - 流动相不稳定 (可能性较小) - 溶剂输送系统 (流速变化) II. 所有峰都向高保留值方向漂移 - 在水/有机溶剂的混合体系中，有机溶剂含量减少 - 柱改变 (可能性较小) - 溶剂输送系统 (流速变化) III. 离子型化合物的色谱峰的保留值漂移 -流动相中挥发性组分损失 (离子强度, pH 漂移) - 柱改变 (键合相或污染) I. 与流动相有关的问题 - 使用新鲜的流动相 ?pH ?电导 ?色谱性能测试 II. 与色谱柱有关的问题 - 测试新柱 - 用标准的测试混合样测试新柱 - “清洗” 色谱柱后再测 - 考虑样品基质与使用条件对柱稳定性的影响 良好的柱使用规范 预柱与保护柱 Authoring Division Name File Name Security Notice (if required) 带Techtron保护柱的 Zorbax 卡套柱 min 制备样品: 流动相 样品制备方法的进步 操作条件 -- 流动相对柱寿命的影响 操作条件 -- 流动相对色谱柱寿命的影响 在安装柱前后测试压力差 如果柱压力太高，反装色谱柱，并用10-20倍柱体积的流动相冲洗色谱柱，监测压力变化 若出现沉淀 (如：蛋白凝聚、细胞物、聚合物) 设法用相应的可溶性溶剂，如 0.1% TFA / 80% 乙腈, 6M 盐酸胍, THF, HFIP 若仍无效，应考虑更换过滤片 Column Inlet Frit 由于键合相的水解或硅胶的溶解而造成的色谱柱填料的变化是不可逆的 由于污染而产生的色谱柱变化可以通过适当的清洗使之修复 梯度洗脱的方式 (水 - 强有机溶剂) 通常最有效 低 pH 流动相, 如 0.1% TFA or 0.01M H3PO4, 也是有效的 升高温度（60-80℃） 6M盐酸胍、异硫氰酸胍、尿素等溶液可用于清除蛋白质的沉积 XDB, 有机聚合物等填料可使用高pH 水溶液 /有机溶液，如： 0.01M NaOH 50% 异丙醇 /水溶液，硅胶基质应尽量减少接触时间 (15-30 min). 总 结 如果使用时加以注意，大部分的液相色谱柱的问题是可以预防的 - 流动相必须是互溶的，无颗粒 - 使用保护柱和在线过滤器，并定期更换 - 使用恰当的样品制备方法 - 使用恰当的色谱柱清洗程序 - 不同类型的色谱柱，请选择不同的操作条件 (如： SB: pH 1-6, XDB: pH 3-11) - 保存柱反压及重要的色谱参数的记录 (如： R, N, As, k) - 色谱柱需保存在有机溶剂中 (乙腈) Hi There... We will start with some more survey results from LC/GC to show some of the most common problems with columns and HPLC. The number on problem by far, is high back pressure. This can be caused by plugged frits as well as column contamination or solvent/sample immiscibility. Poor reproducibility, low sample recovery, and loss of resolution are the next most common problems as reported by chromatographers. Instability and leaks are usually a function of the HPLC hardware and are next as w