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十、分光光度法 考试内容 分光光度法概述、吸收定律、显色反应、分光光度计及测定方法 考试要求 了解分光光度法的基本原理。 (1)物质对光的选择性吸收 光是一种电磁波，具有波粒二象性。物质的颜色是由于物质对不同波长的光具有选择性吸收作用而产生的。当一束光照射到某物质或某溶液上时，只有入射光中光子的能量hυ与被照射物质粒子的基态和激发态之间的能级差△E相等的那部分波长的光，才会被物质或其溶液所吸收。不同的物质微粒由于结构不同而具有不同的量子化能级，其能级差也各不相同，因此物质对光的吸收具有选择性。 单一波长的光称为单色光，单色光只是一种理想的单色，绝对的单色光难以获得，各种单色光之间也无严格的界限。 白光可以色散成单色光，各种单色光也可以混合成白色，而且两种适当颜色的单色光按一定强度比例混合也可得到白光，这两种颜色的光称为互补色光，图中处于直线关系的两种单色光均为互补色光。 如果溶液对各种波长的光呈选择性吸收，则溶液呈现透过光的颜色，亦即呈现被吸收光的互补色光的颜色。 (2)光吸收曲线 将各种波长的单色光依次通过一定浓度的某一溶液，测定该溶液对各种单色光的吸收程度，以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，可以得到一条曲线，该曲线称为吸收光谱或光吸收曲线。光吸收程度最大处的波长叫最大吸收波长，用λmax表示。 对于光吸收曲线有以下规律： ①物质的吸收曲线是一种特征曲线，不同物质的吸收曲线的形状不同，λmax也不同，这是分光光度法进行定性分析的依据。 ②相同物质，不同浓度的溶液，其光吸收曲线的形状不变，λmax也不变，这是分光光度法进行定量分析的依据。 ③在最大吸收波长附近，测量的吸光度灵敏度最高，这一特征可作为定量分析选择入射光波长的依据。 掌握朗伯-比耳定律的原理、应用及摩尔吸光系数，了解引起偏离朗伯-比耳定律的因素。 (1)Lambert-Beer定律：当一束平行单色光通过均匀无散射的真溶液时，溶液的吸光度与吸光物质的浓度、液层厚度的乘积成正比。其数学表达式是 A=abc 式中：A为吸光度；a为吸光系数()；b为液层厚度(cm)；c为吸光物质的浓度() 当浓度用表示时，则用摩尔吸光系数(ε)表示，其单位是。此时Lambert-Beer定律可表示为 A=εbc 摩尔吸光系数ε在数值上等于浓度为1、液层厚度为1cm溶液的吸光度。 ε是吸光物质在特定波长下的特征常数，它与入射光波长、溶液的性质以及温度等因素有关，而与溶液的浓度和液层厚度无关，故常用ε来衡量吸光物质对光吸收的灵敏程度。 (2)透光度T指透过光的强度It与入射光的强度I0之比：T=It/I0 (3)A=-lgT (4)Lambert-Beer定律的使用条件：入射光是单色光；待测溶液是真溶液；物质对光只产生吸收，不能发生散射、反射及光化学反应。 (5)引起偏离Lambert-Beer定律的原因：Lambert-Beer定律所描述的吸光度与待测物质的浓度之间的关系应该是一条通过坐标原点的直线。但实际工作中，特别是浓度较高时，常出现标准曲线偏离线性的现象，这种现象称为偏离Lambert-Beer定律。 偏离Lambert-Beer定律的原因很多，主要原因是仪器提供的单色光不纯，另外还有溶液本身的物理和化学因素所引起的，包括介质不均匀，待测溶液浓度过高，溶质的缔合、解离、互变异构及分解等。 掌握显色反应的特点和显色条件的选择。 在分光光度分析中，将待测组份转变为有色化合物的反应称为显色反应，与待测组分形成有色化合物的试剂称为显色剂。 显色反应应该符合以下要求：①定量进行；②选择性高；③生成的有色物质有一定的稳定性；④反应的灵敏度高。 显色反应能否完全满足分光光度法的要求，除了与显色剂的性质有主要关系外，还与显色反应的条件有关，包括显色剂的用量、溶液的酸度、显色反应的时间和温度。如果显色反应的条件选择不当，将会影响分析结果的准确度。 掌握分光光度法的应用和测量条件的选择。 (1) 测量条件的选择 为了使测定结果有较高的灵敏度和准确度，必须选择合适的测量条件： ①入射光波长的选择：选择原则“吸收最大，干扰最小”；方法“绘制吸收曲线”。 ②吸光度范围的选择：通过调节溶液的浓度和比色皿厚度，使测定的吸光度值在0.2～0.8，测定结果的相对误差才小于4％，才能满足一般的测定要求，当吸光度等于0.434时测定结果的相对误差最小。（△T=1％） ③参比溶液的选择：基于吸光度具有加和性，可用适当的参比溶液消除干扰。其具体做法是，使用参比溶液调节仪器的零点，消除由于溶剂、试剂及比色皿壁等对入射光的吸收和反射所造成的误差。 A.如果样品溶液、试剂、显色剂均为无色时，可用配制溶液的溶剂（一般为蒸馏水或去离子水）作为参比溶液，称为“溶剂空白”。 B.如果样品溶液中其他离子有色，而试剂