第二章LAM修改.ppt

GE HBGCHU LAM 核酸分离、纯化原则 保持核酸分子一级结构的完整性 分离核酸原则： 1）温度不要过高； 2）控制 pH 值范围( pH 值 5-9); 3）保持一定离子强度; 4）减少物理因素对核酸的机械剪切力. 5) 尽量简化操作步骤，缩短提取过程，以减少各种 有害因素对核酸的破坏 核酸的纯化应达到以下要求 1. 核酸样品中不存在对酶有抑制作用的有 机溶剂和过高浓度的金属离子； 2. 其它生物大分子如蛋白质、多糖和脂类 分子的污染应降到最低程度； 3. 排除其它核酸分子的污染，如提取DNA 分子时应去除RNA，反之亦然。 防止核酸的生物降解 细胞内或外来的各种核酸酶能消化核酸链中的磷酸二酯键，破坏核酸一级结构。 所用器械和一些试剂需高温灭菌，提取缓冲液中需加核酸酶抑制剂。 1 细胞的破碎 2 核蛋白的解聚、变性蛋白的去除 3 核酸的沉淀 4 核酸的浓度测定 5 核酸的保存 Applications Estimation of the size of DNA molecules following restriction enzyme digestion, e.g. in restriction mapping of cloned D