细胞工程制分析.ppt

1990－1999年间, 罗氏公司参与非法的维生素价格操纵协议，其他参与其中的公司还有BASF（德国）和Rhone-Poulenc SA。 1999年,罗氏接受美国给予5亿美金罚款的处罚, 这是美国历史上最大一笔罚金；同一事件，2001年 欧洲委员会给予的罚金为4.62亿欧元,这也破了欧洲的罚金记录。 * 集落刺激因子:可刺激骨髓未成熟细胞分化成熟并在体外可刺激集落形成的细胞因子。 * 参考李元《基因工程药物》p144 * BALL-1 人B淋巴细胞急性白血病细胞叙利亚仓鼠肾细胞系/BHK-21 * 强生公司(JNJ)表示，2009年7月已完成了对Cougar Biotechnology Inc价值8.94亿美元的收购， * PBS:Phosphate Buffered Saline PBS 1L配方pH7.4:磷酸二氢钾(KH2PO4),磷酸氢二钠(Na2HPO4),氯化钠(NaCl),氯化钾(KCl),加水。 * BALB/c小鼠〖简 介〗：1913年，贝格(Bagg)从美国商人欧希尔(Ohio)处购得的白化小鼠原种，以群内方法繁殖。麦克·多威尔(MacDowell)在1923年开始作近交系培育，至1932年达26代，命名为BALB/c品系。安德尔文特(Andervont)等人使BALB/c广为传播和应用。1985年我国从美国NIH引进到中国医学科学院实验动物研究所，为BALB/c第180代。毛色：白化。主要特性：①乳腺肿瘤自然发生率低，但用乳腺肿瘤病毒诱发时发病率高;卵巢、肾上腺和肺的肿瘤在该小鼠有一定的发生率。②易患慢性肺炎。③对放射线甚为敏感。④与其他近交系相比，肝、脾与体重的比值较大。20月龄的雄鼠脾脏有淀粉样变。⑤有自发高血压症，老年鼠心脏有病变，雌雄鼠均有动脉硬化。⑥对鼠伤寒沙门氏菌补体敏感，对麻疹病毒中度敏感。对利什曼原虫属、立克次氏体和百日咳组织胺易感因子敏感。主要用途：广泛地应用于肿瘤学、生理学、免疫学、核医学研究，以及单克隆抗体的制备等 网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞,在周围血液中的数值可反映骨髓红细胞的生成功能,因而对血液病的诊断和治疗反应的观察均有其重要意义。 网织红细胞是红细胞的前身。 3、酚红 酚红普遍作为培养基的pH指示剂 4、保护剂 细胞保护剂指保护细胞免受由渗透压变化、剪切、毒性金属和氧化剂所引起的损伤的物质。在生物反应器中培养的细胞会受到机械搅拌和气泡运动所产生的剪切损伤，某些大分子化合物，如甲基纤维素、葡聚糖、PEG、聚乙烯吡咯烷酮、Pluronic F68、血清白蛋白，能够减轻这种损伤。 5、还原剂 某些还原剂在细胞培养中有特殊作用。β－巯基乙醇在杂交瘤细胞培养中能刺激抗体分泌，并促进胱氨酸利用。 血清 常用的血清是小牛血清、胎牛血清、马血清和人血清。最常用的是小牛血清。 血清是极其复杂的混合物，含有食物物质、代谢物、激素、血浆蛋白、破碎细胞释放物质、采血中引入的污染物。由于历史原因，商业培养基大都是按添加血清来设计的，使用血清技术也很成熟，尽管使用血清有许多缺点，仍将其作为细胞培养最重要的添加剂普遍采用。 2、pH 大规模培养时影响培养液的pH稳定性的主要因素有三种： （1）缓冲液的缓冲能力及种类 （2）对流空间大小 （3）葡萄糖浓度 培养液中正常的缓冲系统是NaHCO3/CO2系统，它是一种弱缓冲系统，其pK为6.1，低于生理学最佳要求。这种缓冲系统要求在培养液上面的对流空间加入CO2以防止它的丢失及增加羟基离子。 （四）重组人红细胞生成素 概述 CHO细胞培养过程与工艺控制 分离纯化工艺与质量控制 红细胞生成素（erythropoietin，EPO） 又称促红细胞生成素或红细胞生产刺激因子，是一种集落刺激因子。 它由肾脏和肝脏产生，其主要功能是刺激造血始细胞分化为红细胞，维持外周血中红细胞的正常水平。 主要作用于红系集落生成单元（CFU-E），通过与CFU-E中的红细胞生成素受体结合而加速CFU-E的分化和增殖，促进其产生红细胞，维持外周血的正常红细胞水平。 165Aa, 相对分子质量为（3.5 ~ 4.0）×104 的糖蛋白 天然红细胞生成素种类 以人或动物的尿、血等为原料，分离、纯化得到。 种属不同：人、小鼠、猴红细胞生成素等。 1971年, 从贫血羊血浆中分离到羊EPO 1977年, 从贫血患者尿液中分离到人EPO hEPO形式: EPO-α、EPO-β 氨基酸组成及顺序相同，165Aa,分子量、等电点及生物活性类似。 糖基化及含量不同：EPO-α含有较多的N-乙酰氨基葡萄糖和N-乙酰神经氨酸，总含糖量较EPO-β高。 重组人红细胞生成素（rhEPO） 将红细胞生成素的基因连接到表达载体上，转化CHO细胞，从细胞培养上清液中