实验一--显微镜的使用分析.pptxVIP

显微镜的使用实验目的：了解几种显微镜的结构，使用原理，用途。掌握如何提高普通显微镜的分辨率的方法。实验原理：共同的原理：都是利用物镜与目镜的两次成像原理实现将物体放大一定的倍数。几种显微镜的区别：1、普通光学显微镜：也叫复式显微镜，最大分辨力一般为0.2微米，从构造上可分光学、机械和电子三大系统。应用：适于观察一般固定的，有色的透明度较高的标本。2、暗视野显微镜：原理：以丁达尔现象为基础设计，光源不进入物镜，视野是暗的，被检样品因斜照射发生衍射和反射是亮的。可观察到0.2-0.004微米直径的微小粒子。应用：但它分不清被检物的细微构造，它常用于观察物体的存在与运动3、相差显微镜：原理：以光的干涉现象为基础设计的，用装有环状光栏的聚光器造成的空心光线柱，使直射光(背景)和衍射光(样品)分开。同时在物镜的后焦面上装有相位板，使直射光和衍射光发生干涉，从而把我们肉眼不能见的相位差变为可见的振幅差，同时相位板上装有吸收膜，吸收部分直射(或衍射)光以增加反差，使人们能够看清更加细微的结构。应用：所以相差显微镜一般用于观察活细胞的细微结构。4、荧光显微镜：以紫外线(3650A)或蓝紫光(4200A)照射某些物质，可激发其产生荧光的原理为基础设计的获得方法：①利用一个高发光效率的光源，经过一个滤光系统得到紫外光(或蓝紫外光)，直接照射标本中的自然荧光物质，使其产生自发荧光，再加以镜检。②以荧光染料先对标本进行染色，然后使之在上述光源照射下产生次生荧光，再加以镜检应用：观察荧光(或次生荧光)物质在细胞内分布情况，以及测定细胞器的生理活性。如何提高显微镜的分辨率？分辨率：物镜分辨率是指分辨被检样品细微结构的能力。通常以能清晰地分辨两个物体点的最短距离来表示。其公式如下：R=0.61×λ/N.A．R：分辨率；λ：照射光线波长；N.A．：物镜数值孔径分辨率以分辨两个点的最短距离表示，R值愈小，分辨能力愈大。增大数值孔径，减小入射光的波长。三、实验用品：(一)材料：草履虫，洋葱内表皮，紫鸭趾草等花粉，菠菜叶。(二)用品：普通光学显微镜，暗视野显微镜，相差显微镜，荧光显微镜，载玻片，盖玻片，吸管，镊子，剪刀等。四、实验方法：用哪种显微镜比较合适？l．观察草履虫的（外形、运动、）纤毛、食物泡等。取少许棉花纤维或擦镜纸纤维？（阻碍草履虫的运动，便于观察），放于载玻片上，在其上滴一滴草履虫悬液，然后加盖玻片观察。2．洋葱表皮细胞和菠菜叶的细胞核、叶绿体的观察在载玻片上滴一滴水，撕洋葱鳞茎内表皮或菠菜下表皮一小块放于其中，使其展开，然后加盖玻片观察。3．紫鸭趾草花粉外形、表面突起的观察在载玻片上滴一滴水，取紫鸭趾草雄蕊在其中沾几下，然后盖片观察。