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生物化学实验 ―教案― 侯沁文 目 录 实验一 糖的颜色反应 1 实验二 糖的还原作用 3 实验三 多糖的实验 4 实验四 糖的旋光性和变旋现象 5 实验五 血糖的定量测定（葡萄糖氧化酶法） 7 实验六 人血清中总胆固醇的测定 8 实验七 牛奶中粗脂肪含量的测定 9 实验八 牛奶中酪蛋白的提取 11 实验九 牛奶中酪蛋白含量的测定 12 实验十 氨基酸的纸层析 14 实验十一 醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质 16 实验十二 蛋白质的颜色反应 18 实验十三 蛋白质的沉淀反应 20 实验十四 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子质量 21 实验十五 双缩脲法测定蛋白质浓度 22 实验十六 考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度 24 实验十七 紫外光吸收法测定蛋白质浓度 25 实验十八 血清谷丙转氨酶的测定 27 实验十九 过氧化物酶的作用 28 实验二十 溶菌酶的提纯结晶 29 实验二十一 酵母RNA的提取 30 实验二十二 RNA的定量测定（苔黑酚法） 31 实验二十三 DNA的提取及含量测定 32 实验二十四 荞麦中总黄酮的定性定量研究 32 实验一 糖的颜色反应 [实验目的及要求] 1. 掌握莫式（Molisch）试验鉴定糖的原理和方法2. 掌握塞式（Seliwanoff）试验鉴定酮糖的原理和方法3. 掌握杜式(Tollen)试验鉴定酮糖的原理和方法[实验原理] 1．莫式试验：糖经无机酸（浓硫酸、浓盐酸）脱水产生糠醛或糠醛衍生物，后者在浓无机酸作用下，能与а-萘酚生成紫红色缩合物。 2．塞式试验：酮糖在浓酸的作用下，脱水生成5-羟甲基糠醛，后者与间苯二酚作用，呈红色反应；有时亦同时产生棕红色沉淀，此沉淀溶于乙醇，成鲜红色溶液。 3．杜式试验：戊糖在浓酸溶液中脱水生成糠醛，后者与间苯三酚结合成樱桃红色物质。 [实验仪器及用品] 仪器：水浴锅器皿：吸管、试管实验药品：蔗糖、葡萄糖、淀粉、果糖、阿拉伯糖、半乳糖、а-萘酚、浓硫酸、95%乙醇、间苯二酚、盐酸、间苯三酚。 [实验试剂] 莫式试剂：а-萘酚5g,溶于95%乙醇并稀释至100ml。现用现配，并贮于棕色试剂瓶中。 塞式试剂：间苯二酚50mg，溶于100ml盐酸（VH2O：VHCl=2:1），现用现配。 杜式试剂：2%间苯三酚乙醇溶液（2g间苯三酚溶于100ml95%乙醇中）3ml,缓缓加入浓盐酸15ml及蒸馏水9ml。临用时配制。 [实验内容及步骤] 一、莫式实验 于4支试管中，分别加入1 ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液和少许纤维素（棉花或滤纸浸在1 ml水中），然后各加莫式试剂2滴，摇匀，将试管倾斜，沿管壁慢慢加入浓硫酸1.5 ml（切勿振摇！），硫酸层沉于试管底部与糖溶液分成两层，观察液面交界处有无紫色环出现。 二、塞式试验 于4支试管中，分别加入0.5 ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%果糖溶液，然后各加塞式试剂2.5ml，摇匀，同时置沸水浴内，比较各管颜色及红色出现的先后顺序。 三、杜式试验 于3支试管中加入杜式试剂1ml，再分别加入1滴1%葡萄糖溶液、1%半乳糖溶液和1%阿拉伯糖溶液，混匀。将试管同时放入沸水浴中，观察颜色的变化，并记录颜色变化的时间。 四、实验现象记录 仔细观察实验中的颜色变化，对于塞式试验和杜式试验还需记录下颜色变化的时间。 [实验目的及要求] 掌握糖的还原反应来鉴定糖的原理和方法。 [实验原理] 费林(Fehling)试剂和本尼迪(Benedict)试剂均为含Cu2+的碱性溶液，能使具有自由醛基或酮基的糖氧化，其本身则被还原成红色或黄色的Cu2O，此法常用作还原糖的定性或定量测定。 [实验仪器及用品] 实验仪器：水浴锅 实验器皿：吸管、试管 实验试剂：硫酸酮、氢氧化钠、酒石酸钾钠、柠檬酸钠、无水碳酸钠、淀粉、蔗糖、葡萄糖。 [实验试剂] 1 费林试剂 试剂A：CuSO4·5H2O 34.5 g,溶于蒸馏水并稀释至500 ml。 试剂B：氢氧化钠125 g，酒石酸钾钠137 g，溶于蒸馏水并稀释至500 ml。 临用时将试剂A与试剂B等体积混合。 2 本尼迪试剂：柠檬酸钠（Na3C6H3O7·11H2O）及50 g无水碳酸钠，溶于400 ml蒸馏水中。另溶解8.5 g硫酸铜于50 ml热水中。将硫酸铜溶液缓缓加入柠檬酸钠-碳酸钠溶液中，边加边搅拌，如有沉淀可过滤。此混合液可长期使用。 [实验内容及步骤] 于3支试管中加入费林试剂A和B各1 ml，混匀，分别加入1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液和1%淀粉溶液1 ml，置沸水浴中加热数分钟，取出，冷却，观察各管的变化。 另取3支试管，分别加入1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液