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User guide ERS-2
Millicell? ERS-2 User Guide
系统测试
在进行测量前,进行下列系统功能测试:
仪表功能检测(电阻及电压测量需要)
1 将仪表与充电器断开
2 将STX04测试电极(具有较短电线的电极)与仪表连接起来:将电极电缆末端的插头插入仪表上的INPUT接口。
3 开关打到ON,模式打到Ohms (Ω).
4 仪表应显示1000Ω,如果不是,用3/32”扁平头螺丝刀调节R Adj,一直到显示1000Ω为止。
5 将模式调到Millivolts,仪表应显示为0。
注意:如果仪表不能显示正确的数值,请参考疑难解答部分。
电压测量前平衡电极:
用Millicell ERS-2系统进行电阻测量不需要平衡电极。进行电压测量时,STX01电极需要进行平衡来消除补偿。
平衡时,准备和测量时相同的电极液,或用PBS缓冲液,0.15MNaCl或0.1M KCl。
1 将Millicell ERS-2 仪表与充电器断开
2 将STX01电极与仪表连接起来:将电极电缆末端的插头插入仪表上的INPUT接口。
3 开关打到OFF,模式打到Ohms (Ω),将电极浸入电极液。当电压电极对连接到关着的仪器时,他们是内部短路,这使探头达到平衡。下表列出了推荐的平衡时间:
如果电极 浸入溶液时间
从未被测试 24h
干燥储存 24h
在溶液中储存 2h
4 进行电极功能检测(如下)
电极功能检测(仅电压测量需要)
1 如果电极第一次使用,或者干燥储存后使用,按上述平衡电极程序进行。
2 将仪表与充电器断开,模式调到Millivolts。
3 将电极尖端浸入与实验培养液相似的电极液中(或者0.1-0.15MNaCl/KCl)。
4 打开开关到ON。
5 如果仪表显示为0,表示电极可以进行电压测量了,如果不是显示0,见疑难解答。
测量细胞电阻和电压
层流罩中准备如下:
充好电的Millicell ERS-2系统;
STX04测试电极;
STX01或者STX03 电极 (Millicell 6, 12和24孔板测试), STX00电极(Millicell 96 孔板测试), 如果要测量电压则之前要进行电极平衡;
没有培养细胞的Millicell培养板;
培养了细胞的Millicell培养板;
70%的乙醇;
3/32”平头螺丝刀
电极灭菌:
电极是没有灭过菌的,推荐用酒精灭菌,但是也可以用环氧乙烷、紫外线或者杀菌剂灭菌。不能使用高温或者火焰灭菌,电极无法承受高温。酒精灭菌流程如下:
1 将电极插入70%乙醇浸泡15min做灭菌,取出电极风干15秒;
注意:不能将电极浸入乙醇超过30min,这会削弱电极的保护层,减短其使用寿命。
2 用与实验培养液相似的电极液(或者0.1-0.15MNaCl/KCl)冲洗电极。
3 若是进行电阻测量,此时电极已可以使用
4 若是进行电压测量,电极应该被放在紫外灯照射。但是在强的可见光和紫外光下会造成电极表面形成黑色氧化膜,正常情况下这层膜并不影响电极使用,但是防止电极暴露于强光可以防止氧化膜形成。
电阻测量:
注意:虽然仪表量程到13,000Ω,但是10,000Ω及以下才具有精确度。
1 将细胞置于室温下
2 如前所述,测试Millicell ERS-2系统
3 确保仪表与充电器断开
4 将模式打到Ohms,开关打到ON
5 将电极短的尖端浸入培养板内部,长的尖端浸入外部。短的尖端不要碰到膜上生长的细胞,长的尖端不要碰到外侧的底部。为了实验结果的稳定和可重复性,确保电极平稳,并与培养板成90°。
6 记录电阻
空白电阻测量:
1 把电极置入空白的杯中(如没有培养细胞的培养板)
2 按照上述步骤5测量空白杯中的电阻
电阻计算:
1 组织电阻:
用含细胞的培养板测出的电阻减去空白电阻,就是真实的组织电阻
2 单位面积电阻:
电阻与组织面积成反比。膜越大,电阻越低。
注意:24mm或更大直径的板的电阻值不应该换算成单位面积电阻,因为STX电极不能在一个相对大的膜面积内产生均一的电流密度。
单位面积电阻用真实组织电阻乘以有效表面积即可,单位是Ωcm2。有效膜面积在下表中列出。
单位面积电阻=电阻(Ω)*有效膜面积(CM2)
单位面积=1 CM2单位面积电阻与膜面积无关,12mm及以下培养板获得的数据可以用来互相比较。
Millicell Cell Culture Insert and Plate Effective Membrane Area
produc
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