Piwil2重编程人成纤维细胞形成肿瘤干细胞的初步研究.docVIP

Piwil2重编程人成纤维细胞形成肿瘤干细胞的初步研究 吴 鑫，何大维，张永波，蔡春红，魏光辉 （400014 重庆，重庆医科大学附属儿童医院泌尿外科，儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室，儿科学重庆市重点实验室，重庆市儿童发育重大疾病诊治与预防国际科技合作基地） [摘要] 目的 初步观察精原干细胞自我更新基因Piwil2重编程人成纤维细胞的细胞形态及功能特征变化，建立Piwil2调控肿瘤干细胞发生过程的细胞实验模型。方法 将携带Piwil2-GFP标记和空载目的基因GFP标记的慢病毒载体分别感染原代培养的小儿包皮成纤维细胞，筛选建立稳定表达Piwil2-GFP和GFP成纤维细胞系，观察细胞形态变化及肿瘤球形成过程，分析细胞染色体核型，裸鼠体内成瘤实验，RT-PCR、免疫组织化学进一步鉴定重编程后细胞的干细胞特征及三胚层分化的相关标志物。结果 转染后第5天，Piwil2-GFP 成纤维细胞开始由长梭形逐渐转变为圆形，第14天出现集落样生长状态，挑选集落重悬后培养形成类似“肿瘤球”样克隆，其细胞染色体核型呈超二倍体的异质性改变。“肿瘤球”样克隆裸鼠体内移植2周时100％形成肿瘤，肿瘤组织学及免疫组化鉴定为来表达多种外胚层、中胚层及内胚层肿瘤标志物的恶性肿瘤，RT-PCR显示细胞及裸鼠肿瘤表达干细胞多能基因Oct-4、Nanog、Sox2，以及三胚层特征标志物。结论 Pi