放射免疫法和ELISA之间的差异研究报告.ppt

ELISA实验结果分析 标准品和标本的OD值减去空白孔的OD值 绘制标准曲线，查出标本浓度 * 浙江万里学院 放射免疫法和ELISA之间的差别 1 放射免疫分析通过放射活性分子共价交联至抗体或抗原上，免疫反应后测定放射活性分子的放射信号来定量检测相应抗体或抗原等，可用于测定包括病毒、细菌、寄生虫、肿瘤以及小分子药物等的多种抗原和抗体。由于该方法特异性好，灵敏度高， 且仪器自动化，操作简便，样品制备简单等，因而自50年代末问世以来已在许多领域中得到广泛的应用。但该方法中操作人员需要接触放射性物质，会损害操作人员的身体，同时测定完成后放射性材料的处置也是个严重的问题。 * 浙江万里学院 总结 2 酶免疫分析是将抗原、抗体的特异性免疫反应和酶的高效催化作用有机结合起来的一种免疫分析方法。将特定的酶标记在抗原或抗体上，在免疫反应后，通过肉眼观察或借助简单的光学仪器测定酶催化底物所生成的有色产物的颜色或吸光度可方便的进行定量测定。 该方法中酶标试剂容易制备、性质稳定、有效期长，且克服了放射免疫分析中放射性同位素对操作人员的危害及荧光免疫分析中所需仪器复杂的缺点，保持了放射免疫技术的灵敏度，成为目前临床检验中应用最为广泛的免疫分析技术。 * 浙江万里学院 * 浙江万里学院 浙江万里学院 * 浙江万里学院 * 浙江万里学院 * 浙江万里学院 * * 浙江万里学院 浙江万里学院 浙江万里学院 浙江万里学院 浙江万里学院 放射免疫法和ELISA之间的差别 付涛（座机电话号码07） * 浙江万里学院 放射免疫法 一、原理： 利用放射性同位素标记抗原或抗体，然后与被测的抗体或抗原结合，形成抗原抗体复合物的原理来进行分析的。 * 浙江万里学院 分析方法 放射免疫法分析有两种方法： 竞争性RIA,又称传统RIA 非竞争性RIA，又称免疫放射分析（IRMA * 浙江万里学院 竞争性RIA 主要特点：标记的是抗原。其原理：未知抗原Ag+标记抗原Ag＊+已知定量抗体Ab标记抗原与抗体复合物Ag＊Ab+未知抗原与抗体复合物AgAb+游离标记抗原Ag＊（去除）。 * 浙江万里学院 基本原理 Ag-Ab + Ag *Ag Ab Ag + + *Ag-Ab + *Ag B 复合物 F 游离物 *Ag与Ag的免疫活性相同 *Ag＋Ag Ab Ag * Ag , AgAb *AgAb Ag *Ag , *AgAb B *Ag F Ag *Ag , *AgAb B *Ag F * 浙江万里学院 Ag *Ag Ab *AgAb AgAb *Ag + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + * 浙江万里学院 Ag 25 50 100 200 400 800 *Ag Ab 分离B、F B% B/ B+F F% F/ B+F R B/F B1% B2% B3% B4% B5% B6% 1 2 3 4 5 6 浓度 * 浙江万里学院 B% 标 准 曲 线 * 浙江万里学院 在体外条件下, Ag与定量的*Ag对限量的特异性Ab的竞争结合反应。 B% F% B/F 1.0 2.0 Calibration Curve 60 * 浙江万里学院 （一）基本试剂 1、抗体 2、标记抗原 3、非标记抗原 （标准品） 二、基本方法 化学结构、免疫活性与被测抗原相同 高纯度 * 浙江万里学院 1、抗体 1）亲合常数K （affinity constant K） 反应抗体与抗原的结合能力 2）交叉反应率 反应抗体的specificity 3）滴度 titer 抗体的稀释倍数 B/F 0.5 1.0 复合物浓度 1 2 3 · · · · · 斜率 -K 10 100 1000 10000 100000 Ab稀释度 工作滴度 高亲和力 高特异性 高滴度 Scatchard作图 * 浙江万里学院 2、标记抗原 1）比活度和放化纯度足够高 比活度——每微克抗原上标记放射性核素的千贝可数（KBq/μg） 放化纯度——具有免疫活性的标记抗原占总放射性的百分数。 90% 2）半衰期足够长 3）保持原有抗原的特性 125I—大分子、3H or 125I—小分子 * 浙江万里学院 （二） B和F的分离 1、第一类 2、第二类 双抗体沉淀法 PEG沉淀法 固相第二抗体法 二、基本方法 + Ag Ab 1 Ab 2 试管 Ab 2 Ab 1 Ag 可溶性复合物 可沉淀复合物 * 浙江万里学院 三、质量控制（quality control） 1、精密度（precision） 变异系数（ CV ） 2、准确度（accuracy） 回收率 测定值/真实值×100% 90%