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植物组织石蜡切片的制作以及注意事项 1 植物组织石蜡切片的制作方法 ⑴ 固定：用50%或70% FAA固定液（50%或70%酒精：甲醛：冰乙酸=16:1:1; 幼嫩材料用50 % FAA；老的材料用70%的FAA），置于4℃固定24 h。 ⑵ 脱水：将固定液倒去，加入50%乙醇，室温静置30 min；重复一次，室温静置20 min。换成1%番红O溶液(用70%酒精配制)，室温脱水染色过夜。次日继续脱水，酒精浓度梯度和时间依次为：80% 乙醇1h、95% 乙醇 1h、无水乙醇1h、40min（2次）。 ⑶ 透明：1/2无水乙醇+二甲苯混合液1h，纯二甲苯1h、40 min（2次）。最后加入少量二甲苯（浸没材料即可）和碎蜡，放入38℃温箱中过夜。 ⑷ 浸蜡：将温箱温度调至56℃，计时1h；换成二级蜡1h；三级蜡（3次）各1h、1h、40min（从温度上升到56℃开始计时）。 ⑸ 包埋：将带有材料的液体蜡倒入叠好的纸槽中，迅速放入冰水中使蜡凝固，防止气泡产生，以及凝蜡不匀。 ⑹ 切片：修整蜡块，用Lica RM2126切片机切片，厚度5-10 μm。 ⑺ 贴片: 在载玻片上涂少许粘片剂，将切好的蜡带放入温水中，捞至载玻片上，最后置于37℃恒温箱过夜烤片。 ⑻ 脱蜡及染色： ① 番红-固绿对染 ⅰ 脱蜡：二甲苯60min，二甲苯5 min、1/2无水乙醇+1/2二甲苯混合液5 min、无水乙醇5 min、无水乙醇5 min、95%乙醇5 min、80%乙醇5 min、1%番红室温过夜。 ⅱ 染色： 80%乙醇5 min，1%固绿（用95%酒精配制）迅速蘸一下，大约10s，直接放到95%乙醇5min 、无水乙醇5min、无水乙醇5min、1/2无水乙醇+1/2二甲苯混合液5min、二甲苯5 min（2次）。 ② 甲苯胺蓝染色 ⅰ 脱蜡：二甲苯60 min、二甲苯5 min、1/2无水乙醇+1/2二甲苯混合液5 min、无水乙醇5 min、无水乙醇5 min、95%乙醇5 min、80%乙醇5 min、70%乙醇5 min、50%乙醇5 min 、30%乙醇5 min、蒸馏水5 min。 ⅱ 染色： 用0.2-1%甲苯胺蓝染色1-10 min，自来水冲洗30s、 95%乙醇分色大约20s、无水乙醇脱水2次，各5min、二甲苯透明2次，各5min。 ③ I2-KI染色淀粉颗粒 ⅰ 脱蜡：同甲苯胺蓝染色脱蜡 ⅱ 染色： I2-KI 10 min，快速用三氯乙烷冲洗，自来水冲洗30s、无水乙醇脱水2次，各5min、二甲苯透明2次，各5min。 ⑼ 封片：从二甲苯中取出后，立即在载玻片上滴一滴中性树胶，盖上盖玻片，放至37℃恒温箱中烤片。 ⑽ 镜检： 将组织切片置于Motic B5 professional series光学显微镜下( Bock Optronics Inc., Canada)观察, 并用Motic Images Advanced 3.1 软件显微拍照。