流感病毒的鸡胚培养,收获及血凝效价测定实验报告.doc

流感病毒的鸡胚培养,收获及血凝效价测定实验报告 鸡胚培养法 鸡胚培养法（病毒分离培养） 鸡胚是发育的机体，适合许多人类和动物病毒及立克次体的生长增值，常用于痘类病毒、粘液病毒、和疱疹病毒的分离、鉴定、抗原准备、疫苗生产以及病毒性质等方面的研究。鸡胚培养病毒，常用的接种途径包括绒毛尿囊膜，尿囊腔、羊膜腔以及卵黄囊接种四种。根据不同病毒，不同实验目的以及不同来源的标本，选择不同的途径接种鸡胚进行培养，即可达到分离培养病毒和传代病毒的目的。本片主要介绍尿囊腔和羊膜腔两种接种途径在病毒分离培养和传代中的应用。 鸡胚的接种方法、孵育及收获 一、 仪器和器材 SPF鸡卵或鸡胚、二级生物安全柜、孵卵箱或恒温箱、检卵灯、照蛋灯、开卵钻、卵盘、1ml、1次注射器、医用胶布、液体石蜡、无菌镊子、巴氏吸管、15 ml无菌离心管、试管架、96孔微量反应板、加样槽、移液器、75%酒精、生理盐水等。 二、 鸡胚的孵育 应选择保存温度在100左右，时间不超过10天，卵壳薄而色浅的鸡卵，用于鸡胚的孵育。特别脏的鸡卵需用清水清洗，用布擦干后孵育，干净的鸡卵不必做任何处理。 将鸡卵置于380C---390C孵卵箱，在孵卵箱底层盛水器中放入干净自来水，以保证鸡胚发育的湿度，病保持良好的通风，孵育至第四天，于检卵灯上检查鸡胚受精与否及发育情况。受精鸡卵可见清晰地血管小团和发育的鸡胚迹象，似蜘蛛壮，未受精鸡卵仅能看见模糊的卵黄黑影，无鸡胚迹象。在孵育过程中，应随时对鸡胚进行检查，淘汰濒死或已经死亡的鸡胚。若在恒温箱里孵育鸡胚，则应在恒温箱底层放入装满水的广口容器，并从孵育的第3天起，每天180度转到鸡胚1—2次，是鸡胚发育匀称。也可直接订购孵育9—11日龄的鸡胚。 如何判断鸡胚存活状态：1胎动：于检卵灯下可见活胎有明显的自然运动，但胎龄大于14天的胚胎，胎动不明显，甚至无胎动，死胎则无任何胎动，胎发红似出血样，有的呈现黑快。2血管：活胚可见清晰地血管，卵壳较薄者还可见血管的搏动。死胎血管模糊，成淤血带或淤血块。3绒毛尿囊膜发育界限：生活良好的胚胎可见密布血管的绒毛尿囊膜，与胚胎的另一面形成良好的界限 须将上面三个方面结合起来进行观察，如果胚胎活动呆滞或不能主动地运动，血管模糊扩张，或折断沉落，绒毛尿囊界限模糊，则可判断胚胎濒死或已经死亡。 三、 鸡胚接种（尿囊腔） （一） 尿囊腔接种：一般应用于流感病毒、新城鸡瘟病毒和腮腺炎病毒的适应、传代和病 毒量的扩增。病毒在尿囊的内胚层细胞中繁殖，并释放到尿液中，因此，在尿囊液中含有大量病毒，可用血凝实验来测定病毒的存在。1.接种方法及步骤：选择发育良好的9—11日龄鸡胚，用于尿囊腔接种，在检卵器上画出鸡胚的气室边界及胎位，在胚胎面与气室交界边缘约1mm处避开血管做一标记。此即为注射点，用酒精消毒，用开卵钻在注射点部位开一个约2mm的小孔，勿损伤壳膜，用注射器注入：0.1---0.2ml接