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海参中丝氨酸蛋白酶的分离纯化及其与自溶关系的研究 整个课题的研究工作的完成情况 1、海参中的丝氨酸蛋白酶的分离纯化。海参体壁提取液经硫酸铵沉淀得到粗酶液。用该粗酶液，对其中丝氨酸蛋白酶进行了底物特异性及酶学性质的探索。在此基础上用Cellulose-DE-52阴离子交换柱进行分离并收集活性峰（使用的底物为BOC-Phe-Ser-Ary-MCA）。 2、海参中丝氨酸蛋白酶与自溶关系的研究。首先，选择了6种丝氨酸蛋白酶的特异性抑制剂进行分析对比，发现PMSF、TPCK、TLCK对海参自溶都有明显的影响，TPCK、TLCK对海参自溶用不同程度的促进作用。Aprotinin、AEBSF-HClSuc- Ala- Ala- Ala- MCA、Suc- Ala- Pro- Ala- MCA为底物）都有不同程度的促进作用。 另外还发现，加入TPCK后，自溶产物中的可溶性蛋白含量（Foin-酚法）及弹性蛋白酶（以Suc- Ala- Ala- Ala- MCA为底物）活力均较对照组高。因此，推测弹性蛋白酶可能参与海参自溶。因此，需要检测弹性蛋白酶抑制剂对海参自溶的影响，来判断弹性蛋白酶是否参与海参自溶。 二、研究工作进行到现在所遇到的主要问题 1、对海参中丝氨酸蛋白酶的分离纯化用Cellulose-DE-52阴离子交换柱分离出的酶进过超滤浓缩后其酶活性有很大下降，走凝胶柱没有得到好的分离效果。 2、在做其自溶关系的时候自溶差异能够很好的通过电泳图展示但是加抑制的实验组与对照组的差异性总是不很明显，但是我目前通过这些实验现象得出了一个实验结论：海参中丝氨酸蛋白酶类中的弹性蛋白酶很可能参与海参自溶。 这个实验有待于进一步研究。 三、剩余研究工作的时间安排 姓名 工作计划及时间节点 时间 需购买的试剂 需使用的大型仪器设备 教师意见 孟泽铃 用丝氨酸蛋白酶抑制剂分别对海参系统做其与自溶的关系研究。为大论文补充数据。 8.1—9.31 AEBSF-HCl 电泳相关药品及设备 同意 孙黎明 2012.07.30