蛋白纯化系统详解.ppt

* Database browser * * * DuoFLow 阀系统 AVR9-8辅助泵实现自动切换上样 DuoFLow 阀系统：柱串联 去除血清中高丰度蛋白：IgG和HSA 以用于2D电泳分析 DuoFLow 阀系统：柱串联 利用各种阀构建 级联层析系统， 实现特定目的 A:样品经阀1 ?柱1 ?阀3 ?阀4 ?收集器 B: 特定组份经阀4? 阀2?Loop ?柱2 ?阀3、4 ?收集器 前一柱子流出的特定组份直接上第二根柱子二次分离 DuoFLow 阀系统 阀系统： 2D-LC（Liquid Chromatography） 样品：蛇毒 1D Column：Uno Q强阴离子交换柱 2D Column：Hi-Pore RP 318 C18反相分析柱 1D柱第11组分由阀门导向样品环中，继续1D色谱分析，完毕后，自动进行2D反相柱的平衡，然后进样（1D第11组分），进行2D反相分析。 第一维色谱，UNO Q1离子交换 第二维色谱，RP C18反相，第一维11管组分在第二维分成多个组分 第一维第11管组分1mL经过检测器后没流到收集器中，而是流到第二维色谱的进样环中，所以以空白表示，没标以灰色 DuoFLow 3XAVR7-3 实现三柱级联 前一柱子未结合的蛋白进入第二、三根柱子，三根柱子可以独立洗脱 第一根柱子独立上样、洗脱，组份经换向阀进入第二根柱子，独立洗脱，组份经换向阀进入多三根柱子，独立洗脱收集 DuoFLow 阀系统 BioLogic DuoFlow Basic System BioLogic DuoFlow Standard System BioLogic DuoFlow QuadTec Basic System BioLogic DuoFlow QuadTec Standard System BioLogic DuoFlow Maximizer 20 System BioLogic DuoFlow Maximizer 80 System BioLogic DuoFlow PathFinder 20 System BioLogic DuoFlow PathFinder 80 System 一套组件，根据需要配置多种平台，组件共享，资源共享… DuoFLow DuoFLow 软件系统 非常直观，易学 简单明快，4个步骤进入操作： Browser? Setup ? Protocol ? Run 观察样品情况,调节色普图和峰高度 or Go Do Something Else! 2 次击键进入操作: Browser? Run 观察样品情况,调节色普图和峰高度 or Go Do Something Else! DuoFLow 软件系统 Manual Screen DuoFLow 软件系统 Browser – Enter User and Method Name DuoFLow 软件系统 Setup –select hardware DuoFLow 软件系统 Protocol – enter method DuoFLow 软件系统 Post Run Options - Activity DuoFLow 软件系统 Post Run Options–Peak Tagging DuoFLow 软件系统 Post Run Options – TRACE COMPARE 层析图比较 单一柱子单一程序走不同样品 单一样品和单一程序走不同柱子 同一样品和柱子走不同程序 DuoFLow 软件系统 DuoFLow 软件系统 DuoFLow 软件系统 液相层析系统 应用 层析是如何物质实现分类 根据分子物理化学特性的不同而达到分离 极性：polarity solubility, volatility HIC, RP 离子特性：ionic characteristics charge IEX 大小与形状：size/mass diffusion, sedimentation GF 结构特征与活性位点：shape ligand binding, affinity AC 这些特性的区别使不同分子在层析的固定相和流动相的分配不同而达到分离 层析技术在大分子分离纯化的应用 抗体制备生产以及免疫学研究 层析技术 酶工业生产以及酶学研究 蛋白质结构和功能研究 其他研究的进行组分分离 或者样品制备等 其他生物活性分子功能研究 蛋白质结构功能研究方面 一、结构生物学和蛋白质功能研究均需要高纯度的蛋白质 二、层析技术是蛋白质纯化最好的手段 三、层析技术能够满足样品的高纯度、高活性的要求 蛋白质结构生物学研究策略 选择基因 表达载体构建 纯化目的蛋白