关于TTC和Evansblue双染色.docVIP

关于TTC和Evans blue双染色 ? 我 最 近 在 做 心 肌 再 灌 注 损 伤 后 药 物??保 护 作 用 方 面 的 课 题 ,心 肌 梗 死 面 积 的 估 算 采 用 的 是 TTC和Evans blue双染色,即 首先把 心脏用vans Blue进行冠脉灌流，判定出缺血区（不能被染成蓝色）；再用TTC进行染色，判断出坏死区（不能被染成红色 ,但 我 做 Evans blue这 里 老 是 做 不 好 ,分 不 出 红 色 和 蓝 色 ,所 以 就 想 单 独 用 TTC染 色 来 估 算 面 积 ,不 知 这 种 可 行 性 如 何 ,还 请 大 家指 点 . Enjoyinglife 发表于 2009-9-4 09:56 AM 你好，我也要做这个实验了，但是我还没搞清除伊文氏蓝是不是用生理盐水配，TTC是不是用蒸馏水配 好象不是 ，你能不能指点我一下，谢谢！ ni478 发表于 2009-9-4 10:35 AM 我也在做同样的东西，给你看看这个吧，挺有用的。 lanuit 发表于 2009-9-4 11:14 AM 谢谢，你给的东西帮助很大，不过我在实验中遇到了一个问题：我们是在静脉注射evans blue，大约5－6ml，可以从心脏表面看到有染蓝和未染蓝的部分，但是，用TTC染色后，可以看到TTC未染好的部分（颜色）很浅，应该就是梗死区，可是其它部分都是红的，除了表皮上的蓝色外，没有看到里面的组织有蓝色，是不是本来就这样？还是我的实验有问题？ dashowertk 发表于 2009-9-4 11:53 AM 我今天也做了，结果只有心脏表明有蓝色，里面都没有染色。EB溶液在心脏内多长时间可以去冲洗啊 lyping 发表于 2009-9-4 12:33 PM 我是做心肌缺血的。TTC染色后全是红色～不知道什么原因了 dashuiniu 发表于 2009-9-4 01:12 PM 从静脉注射伊文斯蓝是正确的做法，因为冠状动脉注射你不能保证溶剂就刚好通过心脏。为保证心肌细胞不死亡，需用4摄氏度的EB的生理盐水溶剂；可以稍微延长EB在心肌中的时间至3分钟；如果心脏全部为红色，看看是不是TTC的浓度偏高，调节至1%试试。这只是个人建议，愿与你共同学习。 liuxsh7110 发表于 2009-9-4 03:09 PM 这个是个总结，都是DXY的各位战友们发的帖子，自己总结的。好久没上论坛了，希望对大家有用附件不知道为什么老是传不上，就在这贴出来吧一、TTC染色原理：TTC（2，3，5—氯化三苯基四氮唑）是脂溶性光敏感复合物，1894年首次合成用来检测种子的生存能力，1958年开始用来染色检测哺乳动物组织的缺血梗塞。它是呼吸链中吡啶—核苷结构酶系统的质子受体，与正常组织中的脱氢酶反应而呈红色，而缺血组织内脱氢酶活性下降，不能反应，故不会产生变化呈苍白。二、TTC溶液配制：（1??0.1M Na2HPO4: 14.2 mg in 1L distilled H2O2??0.1M NaH2PO4: 12 mg??in 1L distilled H2O3??Mix 1L 0.1M Na2HPO4 with 0.5L 0.1M NaH2PO4 adjust pH to 7.44??Dissolve 1g TTC powder sigma T 8877 in 100ml phosphate solution注意事项：1、TTC新鲜配置。2、再灌注3小时以上。3、新鲜组织切薄片2mm左右放置TTC溶液内。4、TTC放置37度温箱内15-30分钟。5、如当天显色不好，可从TTC中拿出置入10%甲醛过夜再看。二、心肌缺血和梗死范围测定a. 完成全部采血后，开胸再次钳夹左前降支，于颈静脉注入3％Evans 蓝2～3ml，（也可以切下心脏再从主动脉注入EB但切记原结扎部位一定要重扎紧）。确定未缺血与缺血心肌 未缺血心肌呈蓝色，危险区域不染色 。b.经耳缘静脉推注10%氯化钾（2ml/kg），使心脏停于舒张期,开胸取出心脏。c.生理盐水冲洗心脏，剥离心包后称重。d. 将离体心脏用保鲜膜包裹，置于-20下保存1h，切取左、右心房及右心室标本，从非梗死区纵行切开左心室。e. 将缺血区心室肌以平行于房室沟的方向切成4 片，每片厚1～2mm。置入1％氯化三苯基四氮唑 TTC 磷酸缓冲液 pH7.4 中37水浴10～15min。 避光，振荡 f. 10％福尔马林固定10ming. 梗死区不染色，未梗死区染为红色，红色区与未染色区之和为缺血区。以梗死心肌（不染色的心肌）与全左心室心肌（染色与不染色的心肌）重量和比值表示心肌梗死面积。h. 未染色切片固定后行组织学检测。——Downey