2-2-1动物细胞培养和核移植-讲课用重点.pptVIP

①原代培养 动物组织消化后的初次培养。 ①无菌、无毒的环境 对培养液和培养用具进行无菌处理 在细胞培养液中添加一定量的抗生素 定期更换培养液 ②营养 无机物：无机盐、微量元素 有机物：葡萄糖、氨基酸、促生长因子 动物血清、血浆等 合成培养基 ③温度和PH 温度36.5+0.5度，pH7.2～7.4 ④气体环境 O2（细胞代谢所必需的）和CO2（维持培养液PH） 5、应用 问 题 讨 论 1、某植物非常具有观赏价值，你采取什么方法来繁殖后代，使它们继承该植物的全部优良性状？ ２、1997年，美国威斯康星州的一个奶牛场有一头名叫卢辛达的奶牛，年产奶量为30.8t，创造了世界奶牛产量的最高记录。目前世界各国高产牛奶场的奶牛，平均每年产量为十几吨，而我国平均水平仅有3－4吨。你能想办法繁殖卢辛达的后代，使年产奶量为30.8t吗？ 分化潜能变窄：随着细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，分化潜能变窄，这是指整体细胞而言。 细胞核仍具有全能性：细胞核，它含有保持物种遗传性所需的全套基因，而且并没有因细胞分化而丢失基因，因此高度分化细胞的细胞核仍具有全能性。 一、克隆 三、动物体细胞核移植概念: 将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新胚胎最终发育成动物个体。 五、体细胞核移植技术存在的问题 成功率低 * 在治疗烧伤病人时，通常采用的方法是取烧伤病人健康皮肤进行自体移植。但对于一个大面积烧伤的病人来说，自体健康皮肤非常有限，使用他人皮肤来源不足，而且会产生免疫排斥反应。那么，怎样才能获得大量的自体健康皮肤呢？ 动物细胞融合 生产单克隆抗体 动物细胞核移植 动物细胞培养 动物细胞工程常用技术 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础 1、概念： 从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 2、原理： 细胞增殖 取动物组织块 制成细胞悬液 3、过程 相关概念 ★原代培养 ★传代培养 ★细胞贴壁 ★接触抑制 1、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动 物的组织、器官，请解释原因？ 2、为何动物细胞培养过程要将组织分散成单个细胞？ 如何将动物组织分散成单个细胞？ 3、胰蛋白酶的作用是什么？它能将细胞消化掉吗？如果 能，则将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题？ 4、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？ 5、动物细胞培养瓶内表面为何要光滑、无毒？ 6、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？ 8、如何理解原代培养和传代培养？ 9、传代培养的细胞能一直传代下去吗？ 7、若此时细胞数量并未达到人们的需求，怎么办？ 1、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动物的组织、器官，请解释原因？ 2、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢？如何将动物组织分散成单个细胞？ 3、胰蛋白酶的作用是什么？它能将细胞消化掉吗？如果能，则将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题？ 分化程度低，增殖能力强，容易培养 成块的组织细胞靠在一起,彼此限制了细胞的生长和增殖。 先用剪刀剪碎,后用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理。 胰蛋白酶水解细胞间的蛋白质， 能，应注意时间的控制 原 5、动物细胞培养瓶内表面为何要光滑、无毒？ 易于培养细胞贴壁，进行生长、增殖 6、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？ 分裂生长到表面相互接触时 7、若此时细胞数量并未达到人们的需求，怎么办？ 重新用胰蛋白酶处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖 胰蛋白酶处理 动物胚胎或幼龄动物的器官或组织 剪碎 单个细胞 制成细胞悬液 转入培养瓶内培养 原代培养 加培养液 细胞贴壁 接触抑制 分瓶培养 10代细胞 50代细胞 无限传代 少数 少数 传代培养 胰蛋白酶 CO2培养箱 细胞株 细胞系 ①细胞贴壁： ■培养瓶或培养皿壁要求： 内表面光滑、无毒，易于贴附 在培养瓶悬液中分散的细胞很快就 贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 1 动物细胞培养特点： 细胞贴壁、接触抑制 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 ②接触抑制 细胞的接触抑制 贴满瓶壁的细胞，出现接触抑制后，需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶 继续培养，让细胞继续增殖的过程。 ②传代培养 （分瓶培养的过程） （2）重要概念 ③细胞株： 传代培养的细胞能传到10—50代左右，其细胞的细胞核型没有发生变化，这样的传代细胞称为细胞株。 ④细胞系： 细胞株细胞传到50代后有部分细胞的细胞核型发生了变化，带有癌变的特点，可能在培养条件下无限传代下去，这种传代细胞称为细胞系。 目前使用的或冷冻保存的正常细胞一般为10代以内，以