活体细胞溶酶体形态活性荧光染色试剂盒产品说明书（中文版.docVIP

活体细胞溶酶体形态/活性荧光染色试剂盒产品说明书（中文版） 主要用途 活体细胞溶酶体形态/活性荧光染色试剂是一种旨在通过长波长的荧光染料特异性地聚集在溶酶体，并呈现红色，用于分析和观察溶酶体形态以及双重染色或重叠染色定位的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种溶酶体（动物、人体、昆虫等）的形态观察、活性探测和定位标记。产品严格无菌，即到即用，活体检测，分辨率高，操作简捷，性能稳定，滞留持久。 技术背景 会引起溶酶体贮积症1ysosomal storage disorders；LSDs），例如家族性白痴病（Tay-sachs disease）庞贝氏症 Pompe’s disease）。溶酶体荧光探针Tracker RED，是一种含有荧光，自由通过细胞膜，选择性地聚集在溶酶体。它可以对活细胞进行直接染色，在50nm波长可以清晰看到被染成红色的溶酶体。 产品内容 清理液（Reagent A） 毫升 固着液（Reagent B） 毫升染色液（Reagent ） 微升 产品说明书 1份 保存方式 保存 染色液（Reagent ）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保证6月 用户自备 完全细胞培养液：用于染色后培养液更换 24孔细胞培养板：用于贴壁细胞染色的容器 1.5毫升离心管：用于细胞染色的容器 微型台式离心机：用于沉淀细胞 培养箱：用于染色孵育 （共聚焦）荧光显微镜：用于细胞荧光分析 实验步骤 贴壁细胞标准染色 准备1个细胞培养24孔板的待测细胞，细胞铺满率达70％ （注意：可以使用载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和其它培养孔板，见注意事项12） 小心抽去细胞培养液 小心沿着孔壁加入500微升37℃预热的用户自备的完全细胞培养液到细胞培养孔，覆盖培养孔表面 小心加入微升 染色液（Reagent ），小心摇动培养板，使其混匀（注意：参见注意事项9和10） 放进37℃细胞培养箱里孵育0分钟 小心抽去含有 染色液（Reagent ）的细胞培养液 小心沿着孔壁加入1毫升37℃预热的用户自备的完全细胞培养液到细胞培养孔小心抽去完全细胞培养液小心沿着孔壁加入1毫升37℃预热的用户自备的完全细胞培养液到细胞培养孔 即刻在倒置荧光显微镜下进行观察：激发波长57nm，散发波长59nm（溶酶体呈现红色） 贴壁细胞快速染色 准备1个细胞培养24孔板的待测细胞，细胞铺满率达70％ （注意：可以使用载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和其它培养孔板，见注意事项12） 直接加入微升（1：500容量比） 染色液（Reagent ）到1毫升培养液里，小心摇动培养板，使其混匀（注意：参见注意事项9和10） 放进37℃细胞培养箱里孵育0分钟 小心抽去含有 染色液（Reagent ）的细胞培养液 小心沿着孔壁加入1毫升37℃预热的用户自备的完全细胞培养液到细胞培养孔 即刻在倒置荧光显微镜下进行观察：激发波长577nm，散发波长590nm（溶酶体呈现红色） 悬浮细胞或脱离细胞染色 将悬浮细胞或脱离细胞（1 X 106细胞）移入到1.5毫升离心管 放进微型台式离心机离心1分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415） 小心抽去上清液 加入500微升37℃预热的用户自备的完全细胞培养液 加入微升 染色液（Reagent ），充分混匀（注意：参见注意事项9和10） 放进37℃细胞培养箱里孵育0分钟 放进微型台式离心机离心1分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415） 加入00微升37℃预热的用户自备的完全细胞培养液，混匀放进微型台式离心机离心1分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）小心抽去完全细胞培养液 移出5微升到载玻片上，放上盖玻片 （选择步骤）如果需要双重染色，移出3.5微升染色细胞到载玻片上 （选择步骤）加入1微升用户需测的第二染料，放上盖玻片 （选择步骤）放进37℃细胞培养箱里孵育10分钟 即刻在（共聚焦）荧光显微镜下进行观察：激发波长577nm，散发波长590nm（溶酶体呈现红色） 四、细胞双重染色 准备1个载玻片培养皿的待测细胞 小心抽去细胞培养液 小心加入1毫升37℃预热的用户自备的完全细胞培养液 小心加入微升染色液（Reagent ），小心摇动培养皿，使其混匀（注意：参见注意事项9和10） 放进37℃细胞培养箱里孵育0分钟 小心抽去含有 染色液（Reagent ）的细胞培养液 小心加入微升37℃预热的 清理液（Reagent A） 小心抽去 清理液（Reagent